[发明专利]一种利用水溶性高分子通过汉奇反应检测细胞内甲醛含量的方法

说明书

本发明提供一种检测细胞内甲醛含量的方法。以带有β‑二酮结构的水溶性聚合物为原料，通过汉奇反应来检测细胞内甲醛的含量。该方法原料安全，检测实时，灵敏度高，选择性好，有望应用于医疗检测领域。

技术领域

本发明属于材料领域，具体涉及一种利用水溶性高分子通过汉奇反应检测细胞内甲醛含量的方法。

背景技术

甲醛是结构最为简单的醛类，是一种对人体及环境带来毒性和污染的物质。而人体内通过一些脱甲基酶和氧化酶的作用也会产生一些内源性甲醛，一般人体细胞内的甲醛含量为100-400μmol/L。已有众多报道称体内的甲醛含量过高会导致一些疾病，如阿尔兹海默症，以及还有一些癌症类等。所以必要且急需研究出一种对细胞内的甲醛含量检测的方法。传统细胞内检测甲醛的方法主要通过设计一些荧光探针，存在结构复杂，灵敏度不高，检测限低，实时性不强的缺点。而传统的方法也包括以乙酰丙酮与铵盐为原料，通过汉奇反应来检测细胞内甲醛含量。但乙酰丙酮毒性较大，且荧光信号弱，不易保存，在使用推广方面存在一定的缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测细胞内甲醛含量的方法。以带有β-二酮结构的水溶性聚合物为原料，通过汉奇反应来检测细胞内甲醛的含量。该方法原料安全，检测实时，灵敏度高，选择性好，有望应用于医疗检测领域。

本发明所提供的检测细胞内甲醛含量的方法，包括下述步骤：

1)配制用于检测细胞内甲醛的检测液；

2)将上述用于检测细胞内甲醛的检测液与细胞接触，待细胞吞食后，移去检测液，加入已知浓度的甲醛溶液，检测细胞上的荧光强度，重复上述操作检测加入一系列已知浓度的甲醛溶液后细胞上的荧光强度，得到细胞上的荧光强度与甲醛浓度的关系；

3)将上述用于检测细胞内甲醛的检测液与甲醛含量待测的细胞接触，待细胞吞食后，移去检测液，检测细胞上的荧光强度，参照步骤2)中得出的荧光强度与甲醛浓度的关系，得到细胞内甲醛的含量。

上述方法步骤1)中，所述用于检测细胞内甲醛的检测液，为：带有β-二酮结构的水溶性聚合物和铵盐的溶液。

其中，所用溶剂可为本领域人员知晓的，任何能够适合细胞检测的缓冲液，如PBS缓冲液。

其中，所述带有β-二酮结构的水溶性聚合物，具体可为式I所示的聚合物：

式I中，x、y和n均表示聚合度，x＝20-50，y＝20-50，n＝10-30。

所述铵盐可选自：氯化铵，硫酸铵，乙酸铵等，具体可为乙酸铵。

所述带有β-二酮结构的水溶性聚合物(按照二酮的物质的量计算)与铵盐的摩尔比可为1:1-1:10。

上述式I所示的带有β-二酮结构的水溶性聚合物，由式II所示的聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯和式III所示的乙酰乙酸甲基丙烯酸乙二醇酯共聚制备得到：

式II中，n表示聚合度，n＝10-30。

上述方法步骤2)中，所述一系列已知浓度的甲醛溶液的浓度为0-100μmol/L范围内的浓度值。

上述方法中所使用的用于检测细胞内甲醛的检测液也属于本发明的保护范围。

本发明旨在提供一种通过汉奇反应来检测细胞内甲醛的方法思路，使用的带有β-二酮结构的水溶性聚合物包括聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯和乙酰乙酸甲基丙烯酸乙二醇酯的共聚物，但不限于此。

本发明进一步改进了传统检测甲醛的汉奇反应，传统方法使用乙酰丙酮作为β-二酮的来源，相比而言，乙酰丙酮的安全性较低，而且产物荧光强度弱，所以采用具有二酮结构的聚合物来提升安全性，并增强荧光强度。