[发明专利]一种桡足类卵的保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及水生生物养殖领域，尤其是涉及一种桡足类卵的保存方法。

技术背景

多年来，轮虫和卤虫作为鱼、虾育苗的开口饵料取得了很好的成效，得到了广泛的应用。但是，轮虫和卤虫并非所有鱼、虾幼苗开口的良好饵料。已有研究表明，桡足类是极佳的生物饵料，桡足类，隶属于节肢动物门、甲壳纲、桡足亚纲。为小型甲壳动物，体长<3mm，营浮游与寄生生活，分布于海洋、淡水或半咸水中。桡足类活动迅速、世代周期相对较长。桡足类可使仔稚鱼的生长和存活率提高，成功培养了很多难以培养的经济水产生物。然而，桡足类在大规模世代培养上有诸多困难，使它们在海洋养殖业中受到了极大的限制。众所周知，轮虫和卤虫之所以能够作为生物饵料大规模应用于水产养殖业，一个很大的原因是轮虫和卤虫的休眠卵能随时孵化出无节幼体供育苗使用。这一点对于大规模生产至关重要。但桡足类滞育卵产卵量低，不利于大量收集，如果能使桡足类正常卵在特殊保存条件下能达到长时间、高孵化率的状态，大量孵化无节幼体用作育苗的饵料，在水产养殖业将具有广阔的前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桡足类卵的保存方法，本保存方法操作简单，易于控制，成本低廉，能有效延长桡足类卵的保存时间、降低卵细胞损伤程度、提高卵细胞活性与孵出率，所孵出无节幼体的活力旺盛，遗传功能完善。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种桡足类卵的保存方法，包括：藻液培养、海水处理、汤氏纺锤水蚤的培养、卵的收集、卵的保存，具体包括以下步骤：

藻液培养：在盐度为29-31‰、光照周期为10-12L：12-10D、温度为20-22℃的条件下，将微藻接种于培养液中培养至对数生长期，待用；在适宜培养条件下培养微藻菌种，能够促进微藻菌种健康的生长与繁殖，为汤氏纺锤水蚤提供合适的营养物质；

海水处理：新鲜海水可采用天然海水，用0.20-0.22μm滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物，灭菌并连续充气24-36小时，后调配盐度至29-32‰；经过除杂、灭菌、充气、调配盐度后的海水适合汤氏纺锤水蚤的生长繁殖，汤氏纺锤水蚤能够在此培养水体中迅速达到生机旺盛的状态，为驯化与产卵做准备；

汤氏纺锤水蚤的培养：对汤氏纺锤水蚤进行5-7个世代驯化培养，培养系统稳定后选取健康纺锤水蚤进行温度、光照、盐度、饵料条件体系优化培养；在最优的温度、光照、盐度、饵料条件体系下培养汤氏纺锤水蚤，能够增强汤氏纺锤水蚤自身免疫力与应激力，提高机体素质，提高产卵量与卵质量；

卵的收集：用300-350µm筛绢收集汤氏纺锤水蚤成体，每100对雌雄成体放置于预置1L新鲜海水的容器内，按照汤氏纺锤水蚤的培养步骤中的培养条件进行产卵培养，每24小时用55-60μm的筛绢收集卵液，将卵洗脱入结晶皿中，在解刨镜下收集直径70-80 μm、墨黑色、外形完整且表面带有刺状突起的健康卵；以致密筛绢收集卵液可以避免对卵造成损伤与擦碰，保持卵表面的蛋白活性与卵的完整度，从而保持卵的活性与孵出成功率；

卵的保存：并250枚卵转移进预置45-50mL新鲜海水的60mL容积细胞培养瓶中，用锡箔纸完全包裹住细胞培养瓶，将细胞培养瓶置于3-5℃、无菌、充氧、黑暗环境中保存；经过优化，汤氏纺锤水蚤的保存时间得到了大大的延长，卵保存60天能保持近80%的孵化率，卵保存90天能保持接近60%的孵化率，卵保存240天后的孵化率接近50%，而且孵出无节幼体的活力较好，遗传功能完善，因此是一种长时效、高孵化率、可持续的桡足类卵的保存方法。

作为优选，藻液培养步骤中的微藻为波海红胞藻（Rhodomonasbaltica）、Rhinomonas reticulate和球等鞭金藻（Isochrysisgalbana）。