[发明专利]一种快速检测肉鸡盲肠淀粉降解细菌的方法

说明书

本发明涉及一种快速检测肉鸡盲肠淀粉降解细菌的方法，包括如下步骤：步骤（1）、样品采集；步骤（2）、稀释样品；步骤（3）、洗脱细胞；步骤（4）、收集滤液；步骤（5）、收集沉淀物；步骤（6）、盲肠淀粉降解细菌的标定；步骤（7）、盲肠淀粉降解细菌的回位鉴定；步骤（8）、肉鸡盲肠淀粉降解细菌的菌丰度的确定及统计分析。本发明不仅可以快速获取肉鸡盲肠中的优势淀粉水解细菌组成的原位信息，还可以用来筛选优质的肉鸡饲料配方，为进一步调控盲肠淀粉发酵对肉鸡生产性能和健康的影响具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种快速检测淀粉降解细菌的方法，尤其是一种快速检测肉鸡盲肠淀粉降解细菌的方法。

背景技术

动物饲料效率是评估现代肉鸡营养和能量代谢功效的重要指标之一。提高饲料效率可以降低生产者的成本，为人类生产更多的食用资源，减少排泄物和温室气体的排放。饲料转化率和残留饲料摄取量是评估动物饲料效率的主要指标。饲料效率是一个复杂的特征，因为它不仅受宿主遗传学和生理状态的影响，而且还受到肠道微生物菌群的影响，因为肠道微生物菌群会影响宿主的营养消化和能量吸收。

大约70％的肉鸡生产成本和饲料成本联系在一起，对廉价饲料原料的追求是永无止境的。肉鸡拥有健康的肠道不仅可以提高饲料营养的消化吸收率，而且能够抵抗肠道致病菌的侵袭，减少因疾病死亡和并发症造成的经济损失，是肉鸡发挥良好生产性能的关键因素。谷物淀粉占饲粮的70％-80％，是肉鸡生长的主要能量来源，饲粮淀粉在肉鸡肠道中的消化率和淀粉颗粒的结构和组成、淀粉颗粒和蛋白质的相互作用以及饲料加工后颗粒的可用性相关。因为淀粉是肉鸡日粮中的主要能量成分，任何能够减少不消化淀粉的策略都会对肉鸡的生产能力有益。虽然总体上肉鸡肠道对淀粉的消化能力良好，饲粮谷物淀粉消化率相对较高，90％糖以及淀粉在肉鸡胃肠道(GIT)中消化，然而多种相互关联的因素都会降低肉鸡淀粉的全肠道和后肠消化率，主要的因素包括：淀粉的结构特点、淀粉的颗粒性状、饲粮中的可溶性纤维和不可溶纤维的浓度以及肉鸡的基因族源。

胃肠道是肉鸡淀粉消化和吸收的主要部位，肠道十二指肠对淀粉消化吸收至关重要，它具有比后肠更低的pH值，是吸收大部分葡萄糖和小肠内其他营养物质的区域。然而最近新一代DNA测序研究表明，除了胃肠道是肉鸡淀粉消化和吸收的主要部位之外,盲肠微生物菌群也参与了肉鸡淀粉的代谢。肉鸡盲肠由于位于肉鸡肠道后段而常常被忽视，流入盲肠的10％未消化饲粮淀粉在盲肠的发酵代谢也因此常常被忽略，大多数研究都集中在如何改善肉鸡肠道中淀粉的消化率，减少饲粮中未经消化淀粉流入盲肠的数量。近年来随着Omics技术的应用和发展，大量的研究通过宏基因组学、宏转录组学和宏蛋白质学确定了盲肠微生物群落的组成，预测了微生物群落的功能，了解和比较了盲肠微生物菌群的信息。由于充满了发酵微生物的盲肠在肉鸡预防病原体定殖，解毒有害物质，回收氮气和吸收额外的营养物质中起着重要作用，因此盲肠微生物菌群在肉鸡代谢疾病中的重要性受到越来越多的关注。

肉鸡肠道健康优化对于精准饲养和精准营养是非常重要的，微生物发酵的代谢产物对肠道健康有直接影响，肉鸡肠道微生物群落和宿主的养分和流体吸收、免疫调节、抵御感染、向大脑传送信号、维持体内的平衡和生长、繁殖有关。在饲料，微生物群落和宿主之间的三角关系中，处于最佳状态的肠道健康对于肉鸡的生产性能是最关键的因素。最新的研究结果表明盲肠是肉鸡胃肠道GIT发酵的主要部位，40％饲粮中未经消化的淀粉(包括植物颗粒和动物颗粒)流入盲肠，靠盲肠微生物菌群降解，转化为微生物需要的养分-短链脂肪酸(SCFA)和气体，为盲肠细菌的发育和生长提供能量，调整肠道健康环境，导致盲肠微生物向有益于改善肠道健康的方向发展，帮助宿主提高了免疫系统的发育，增强宿主肠道的结构和强度(Jamroz等，2002)。