[发明专利]一种破伤风类毒素诱导的灵长类动物迟发型超敏反应动物模型的构建方法

说明书

本发明涉及生物医学研究技术领域，特别涉及一种破伤风类毒素诱导的灵长类动物迟发型超敏反应动物模型的构建方法。该方案中包括以下步骤：以不同生物活性的破伤风类毒素疫苗作为致敏用溶液和攻击用溶液；第0d，除第1组外所有动物由4mg/kg的氯胺酮麻醉，经注射80IU/mL破伤风类毒素疫苗；在两侧大腿的肌肉内注射破伤风类毒素疫苗；4周后，用同样方法加强免疫一次；第9周，再次麻醉动物，对模型动物通过皮下注射0.1mL的破伤风类毒素疫苗进行攻击，对照组动物用不含破伤风类毒素的氢氧化铝佐剂进行攻击。本发明能够有效的建立一种非人灵长类动物迟发型超敏反应动物模型，提供与人更为相关的DTH反应进程并提高实验数据的可信度。

技术领域

本发明涉及生物医学研究技术领域，特别涉及一种破伤风类毒素诱导的灵长类动物迟发型超敏反应动物模型的构建方法。

背景技术

迟发型超敏反应(DTH)是典型的细胞介导的IV型超敏反应，巨噬细胞及敏化的CD4+T细胞是引起细胞及组织损伤的主要因素。人群中，DTH反应被用作经典的细胞免疫反应测试，以测试此前对特定抗原的暴露，并可简单的由皮下注射该抗原而引发。在临床前实验中，DTH动物模型被广泛用于新型免疫抑制剂和免疫调节剂的评价，以及疫苗开发的过程。毫不意外地，在啮齿类动物身上所观察到的药效往往和人类身上有很大不同。该不同主要由于用于人类的生物制剂和啮齿类动物往往不具备交叉反应性，且人类为远亲生殖，其个体差异远远大于近亲繁殖的啮齿类动物。

故急需建立一种非人灵长类动物迟发型超敏反应动物模型，来提供与人更为相关的DTH反应进程并提高实验数据的可信度。

发明内容

鉴于以上问题，本发明提供了一种破伤风类毒素诱导的灵长类动物迟发型超敏反应动物模型的构建方法，来提供与人更为相关的DTH反应进程并提高实验数据的可信度。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种破伤风类毒素诱导的灵长类动物迟发型超敏反应动物模型的构建方法，包括以下步骤：

首先将动物分为两组：第1组为正常对照组，第2组为模型组。以破伤风类毒素疫苗作为致敏用溶液；将破伤风类毒素疫苗用1.5mg/mL的氢氧化铝佐剂稀释后混匀，作为攻击用溶液；第0d，除第1组外所有动物由4mg/kg的氯胺酮麻醉，经注射80IU/mL破伤风类毒素疫苗，在麻醉效果不理想的情况下，使用含1.5-5％异氟烷的0.8-1.5L/min氧气做进一步吸入麻醉；在两侧大腿的肌肉内注射破伤风类毒素疫苗；4周后，用同样方法加强免疫一次；第9周，再次麻醉动物，除第1组外，其余动物均通过皮下注射0.1mL的破伤风类毒素疫苗进行攻击，注射位点在腹部两侧，每侧5点，平行排列，第1组的动物用不含破伤风类毒素的氢氧化铝佐剂进行攻击。

所述作为致敏用溶液破伤风类毒素疫苗的生物活性为80IU/mL。

所述攻击用溶液的破伤风类毒素疫苗稀释为25IU/mL。

所述在两侧大腿的肌肉内注射的破伤风类毒素疫苗的量为1.0mL，且每侧 0.5mL。

本发明提供了与人更为相关的DTH反应进程并提高实验数据的可信度中的应用。

本发明的优点和有益效果在于：提供一种非人灵长类动物迟发型超敏反应动物模型，来提供与人更为相关的DTH反应进程并提高实验数据的可信度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为注射位点红斑，水肿和皮肤硬化评分。**p<0.01造模后与正常动物相比。