[发明专利]用于心肌细胞分离提纯的心肌缓冲液试剂盒及使用方法

说明书

本发明公开了一种用于心肌细胞分离提纯的心肌缓冲液试剂盒及使用方法，涉及生物细胞培养技术领域，试剂盒包括心肌缓冲粉末，心肌缓冲粉末包括7.012‑8.007份Nacl，0.395‑0.403份Kcl，0.123‑0.222份MgSO4.7H2O，0.973‑1.046份葡萄糖，0.060‑0.077份KH2PO4，0.042‑0.071份Na2HPO4，4.766‑5.958份4‑羟乙基哌嗪乙磺酸。采用本发明的试剂盒进中心肌缓冲粉末为低钙粉末，不含有胰酶或添加化学抑制剂，避免了胰酶化学抑制剂对心肌细胞的损伤，适宜于保持心肌细胞活性，因此，采用本发明的试剂盒可最大程度上保证了心肌细胞的活性，细胞存活率更高。

技术领域

本发明涉及生物细胞培养技术领域，具体涉及一种用于心肌细胞分离提纯的心肌缓冲液试剂盒及使用方法。

背景技术

各种基因敲除及转基因小鼠已广泛应用于心血管疾病动物模型的建立，已为心血管疾病机制的研究作出了巨大贡献。体外心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型，可以排除神经、体液的干扰而独立地从细胞和分子水平研究心血管疾病的发生、发展机制，目前的工具鼠多为小鼠背景，而心肌细胞水平的研究多采用大鼠乳鼠心肌细胞，相较于大鼠心肌原代细胞的分离纯化技术及比较成熟的H9C2细胞系体系，小鼠心肌原代细胞的分离纯化明显不足。目前心肌原代细胞分离方法多采用胰酶胶原酶联合消化或单一胶原酶消化，心肌细胞纯化多采用差速贴壁法。

采用胰酶胶原酶联合消化的缺陷是：胰酶对心肌细胞有一定的损伤极大地影响了心肌细胞的存活率，当前虽极力减少细胞与胰酶的接触时间及减少胰酶的消化时间，但对心肌细胞存活率的影响依然存在，这在小鼠心肌原代分离纯化过程中尤为明显。

采用单一胶原酶消化的缺陷是：虽然胶原酶作用较缓和，对细胞损伤较小，但后期需用化学抑制剂(如5-溴脱氧尿嘧啶)抑制成纤维细胞生长以期纯化心肌。在小鼠心肌原代细胞培养中依然存在细胞存活率低、纯度不高等缺陷，且化学抑制剂的存在是否影响心肌细胞的 功能，尚有待证明，且化学抑制剂的存在将增加实验本身的影响因素，使结果出现难以预计的偏倚。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种用于心肌细胞分离提纯的心肌缓冲液试剂盒及使用方法，保证了心肌细胞的活性，细胞存活率更高。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种用于心肌细胞分离提纯的心肌缓冲液试剂盒，所述试剂盒包括心肌缓冲粉末，所述心肌缓冲粉末包括7.012-8.007份Nacl，0.395-0.403份Kcl，0.123-0.222份MgSO4.7H2O，0.973-1.046份葡萄糖，0.060-0.077份KH2PO4，0.042-0.071份Na2HPO4，4.766-5.958份4-羟乙基哌嗪乙磺酸。

在上述技术方案的基础上，所述心肌缓冲粉末用超纯水定容，用NaOH调整PH至7.5。

本发明还公开了一种所述的用于心肌细胞分离提纯的心肌缓冲液试剂盒的使用方法，所述心肌缓冲粉末配制的心肌缓冲液可用于漂洗剪下的心脏组织。

在上述技术方案的基础上，所述心肌缓冲粉末配制的心肌缓冲液可用于配制用于消化心脏组织的Ⅱ型胶原酶溶液。

在上述技术方案的基础上，使用Ⅱ型胶原酶溶液消化心脏组织后，过滤，离心，用所述心肌缓冲粉末配制的心肌缓冲液进行细胞重悬。