[发明专利]一种表面固定双金属离子的磁性纳米材料的制备及应用

权利要求书

1.一种基于固定双金属离子的磁性纳米材料用于磷酸化肽富集的方法，其特征在于，以双金属离子为固相萃取材料，实现对蛋白酶解液中的磷酸化肽的选择性富集。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的双金属离子为具有对单磷酸化肽和多磷酸化肽互补的富集偏向性的两种金属离子。

3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所合成的磷酸化肽富集材料的载体为聚多巴胺包裹的磁性纳米结构材料，尺寸为100～250nm。

4.按照权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于：所述的固定双金属离子的磁性纳米材料通过水热法合成四氧化三铁磁性材料，利用多巴胺碱性条件下的聚合反应，在磁球表面包裹一层聚多巴胺，在机械搅拌的作用下，双金属离子均匀地固定在聚多巴胺层表面。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集的过程为磁性材料固相萃取，其包括步骤：

(1)制备的IMAC材料，用缓冲液清洗3次后，重新分散到缓冲液中；

(2)向体系中加入适量蛋白酶解液，混匀；

(3)采用磁性分离，收集下层固体相；

(4)采用缓冲液冲洗下层固体相3次，每次清洗去除上清，收集材料；

(5)加入氨水洗脱得到磷酸化肽，取洗脱液与基质溶液混合，进行MALDI-TOF MASS检测。

6.按照权利要求5所述的方法，其特征是，所述步骤(1)与(4)的缓冲液由50％乙腈和0.1％TFA组成。

7.按照权利要求5所述的方法，其特征是，所述步骤(1)的材料分散后的浓度为0.1～1μg/μl。

8.按照权利要求5所述的方法，其特征是，所述步骤(2)中材料与蛋白酶解液25℃混旋10～60分钟。

9.按照权利要求5所述的方法，其特征是，所述步骤(5)中加入5μl氨水(0.4M)，25℃混旋5～20分钟，进行洗脱。