[发明专利]一种从杜仲中提取绿原酸的新方法

说明书

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从杜仲中提取绿原酸的方法，特别是涉及一种利用酶法提取，高速逆流色谱分离纯化绿原酸的新方法。本发明优点：本发明提取快捷、迅速，所得产品纯度高，环境污染小。1、应用生物酶解技术，使细胞内有效成分充分溶出。2、采用高速逆流色谱技术分离过程简单、溶剂消耗量少，在短时间内实现有效成分的快速分离，且纯度高。本发明利用生物酶法，促使有效成分充分溶出，乙醇回流提取，再采用高速逆流色谱分离纯化，所得绿原酸纯度高。

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种绿原酸的纯化方法，特别是涉及一种生物酶解技术，采用乙醇做提取剂，后期采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化绿原酸。

背景技术：

杜仲(学名Eucommia ulmoides Oliver)又名胶木，为杜仲科植物。杜仲为落叶乔木，高可达20米，胸径约50厘米。树皮灰褐色，粗糙，内含橡胶，折断拉开有多数细丝。嫩枝有黄褐色毛，不久变秃净，老枝有明显的皮孔。芽体卵圆形，外面发亮，红褐色，有鳞片6-8片，边缘有微毛。

叶椭圆形、卵形或矩圆形，薄革质，长6-15厘米，宽3.5-6.5厘米。基部圆形或阔楔形，先端渐尖；上面暗绿色，初时有褐色柔毛，不久变秃净，老叶略有皱纹，下面淡绿，初时有褐毛，以后仅在脉上有毛。侧脉6-9对，与网脉在上面下陷，在下面稍突起，边缘有锯齿，叶柄长1-2厘米，上面有槽，被散生长毛。花生于当年枝基部，雄花无花被；花梗长约3毫米，无毛；苞片倒卵状匙形，长6-8毫米，顶端圆形，边缘有睫毛，早落；雄蕊长约1厘米，无毛，花丝长约1毫米，药隔突出，花粉囊细长，无退化雌蕊。雌花单生，苞片倒卵形，花梗长8毫米，子房无毛，1室，扁而长，先端2裂，子房柄极短。翅果扁平，长椭圆形，长3-3.5厘米，宽1-1.3厘米，先端2裂，基部楔形，周围具薄翅。坚果位于中央，稍突起，子房柄长2-3毫米，与果梗相接处有关节。种子扁平，线形，长1.4-.5厘米，宽3毫米，两端圆形。早春开花，秋后果实成熟。

杜仲游离氨基酸极少，含有的少量蛋白质，是和绝大多数食品类似的完全蛋白，即能够水解检出对人体必需的8种氨基酸。测定了杜仲所含的15种矿物元素，其中有锌、铜、铁等微量元素，及钙、磷、钾、镁等宏量元素。

杜仲含有较高的绿原酸。绿原酸(chlorogenic acid)又名3一咖啡酰奎尼酸(3-car-feoyquinic acid)，是植物在有氧呼吸过程中经磷酸戊糖途径(HMS)的中间产物合成的一种苯丙素类物质(高锦明等，1999)。近年来的研究结果表明，杜仲叶中绿原酸含量较高，可达1～5.5(臧友维，1989)。绿原酸具有利胆、抗菌、抗病毒、降压，升高白细胞及兴奋中枢神经系统等多种药理作用(张鞍灵等，2001)，是保健品、食品、药品、化妆品等工业的重要原料，因此利用杜仲叶生产绿原酸具有巨大的社会效益和经济意义

发明内容：

本发明优点：

本发明主要采用生物酶解技术，采用乙醇做提取剂，后期采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化绿原酸。本发明方法提取快捷、产品纯度高，得率高，选用食品允许使用的乙醇为提取溶剂回流提取，无化学残留。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种采用酶法提取并与高速逆流色谱藕联，最终得到高纯度绿原酸的方法，其步骤如下：

(1)酶解：干燥杜仲粉碎至40-80目，酶浓度0.3-0.5g/l，酶解温度40-50℃，酶解时间2-3h；

(2)回流提取：加入70-90％乙醇，采用加热回流提取法，料液比1∶10-12，提取温度80-90℃，提取两次，每次提取时间11.5h；

(3)收集：回收乙醇，薄层层析检测分析，收集绿原酸部分；

(4)过滤：过滤，合并两次滤液，得绿原酸粗提物；