[发明专利]利用海藻渣制备的培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺

权利要求书

1.利用海藻渣制备的培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、海藻渣干粉的制备：

a、将新鲜海藻打浆至无明显块状物，向其中加入去离子水并对海藻进行70-80℃加热，加热1-1.5h，再将混合液转移至离心管中，离心管放置在离心机中离心4000-5000r/min，取沉淀物，重复3-5次，收集海藻渣；

b、将海藻渣加入到水中，充分搅拌混合均匀得混合液A，再向混合液A中加入盐酸溶液，将混合液A的PH值调节至6.4-7.4，得混合液B；

c、向混合液B中添加质量为海藻质量1%-5%的复合酶，在32-42℃温度范围内酶解22-26h，得混合液C；

d、收集混合液C中的沉淀物，在烘箱中80-90℃干燥6-8h，得到破壁后的海藻渣干粉；

步骤二、筛选产纤维素酶的菌株：

选取海藻渣腐烂部位，接种于蒸馏水和步骤d中的海藻渣干粉配制成的匀浆培养液中，再通过富集培养、初筛、复筛和刚果红鉴定后筛选出产纤维素酶的菌株；

步骤三、产酶条件的优化：

将纤维素酶活力最高的菌株接入种子培养基中培养至对数期进行产酶条件的优化，探讨不同的pH、温度、氮源、底物浓度、摇床速度、培养时间对海藻渣纤维素的分解及寡糖积累的影响，确定产生寡糖的最优发酵条件；

步骤四、培养含DHA微藻的糖化液：

利用产纤维素酶的菌株处理海藻渣，过滤剩余海藻渣纤维素及珍珠岩，检测纤维素降解率，糖化液可直接作为含DHA微藻的培养基的碳源添加使用；

步骤五、培养基的配制：

采用经过沉淀过滤的淡水、海水、酵母膏和步骤四中的糖化液为原料，配制后的培养基含盐量为0.5-1%、含糖量为8-17%、酵母膏0.2-0.5%；

步骤六、培养基灭菌：

用蒸汽对生产设备、管道等物料接触表面以及培养基进行灭菌，灭菌完成后冷却至25-32℃；

步骤七、接种：

将所选择的菌株经过一级、二级扩培后接种于灭菌完成后的培养基中；

步骤八、恒温发酵：

接种后培养基置于密闭的发酵罐中，恒温发酵过程进行不间断的均速搅拌，同时按每吨物料3-6m3/min的速度供给空气，发酵时间为30-40h；

步骤九、菌粉收集：

将发酵完成的发酵液置于高速离心机进行固液分离，分离后含有一定水份的菌粉再经过烘干，烘干后装入容量密封保存。

2.根据权利要求1所述的利用海藻渣制备培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺，其特征在于：所述步骤一中海藻与去离子水的质量比为1:3-5。

3.根据权利要求1所述的利用海藻渣制备培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺，其特征在于：所述步骤一中盐酸溶液的质量浓度为34%。

4.根据权利要求1所述的利用海藻渣制备培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺，其特征在于：所述步骤一中复合酶是由纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶按照质量比为3:1:2混合而成。

5.根据权利要求1所述的利用海藻渣制备培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺，其特征在于：所述步骤二中刚果红染液的质量浓度为0.1%。

6.根据权利要求1所述的利用海藻渣制备培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺，其特征在于：所述步骤四中培养基的配方为海藻渣30-60 g/L，MnSO4 0.4g/L，K2HPO4 0.4 g/L，蛋白胨3 g/L，酵母粉3 g/L。

7.根据权利要求1所述的利用海藻渣制备培养基发酵生产裂殖壶菌的工艺，其特征在于：所述步骤八中恒温发酵的条件为装料量30-60 g/L，菌株接种量5%，控制pH值恒定为7.0±0.5，全程发酵温度30±0.1℃，搅拌速度130rpm，通气量（V空气/V氧气）1:0.5-1.0，溶解氧含量为20-30%，培养时间24-120h。