[发明专利]一种兽用注射型灭活疫苗佐剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物免疫领域，具体涉及一种兽用注射型灭活疫苗佐剂及其制备方法。

背景技术

灭活疫苗通常是指先对病毒或细菌进行培养，用加热或化学剂(通常是福尔马林)将其灭活，然后与免疫佐剂配合制成的疫苗。特别是在畜牧养殖业，灭活疫苗作为最常用的常规疫苗，因其良好的安全性和较长的保护期，广泛应用于预防传染病的发生。兽用灭活疫苗生产时，免疫佐剂是必不可少的。临床上常用的兽用灭活疫苗佐剂有白油佐剂、氢氧化铝佐剂、蜂胶等，其中白油佐剂是最常用的兽用疫苗佐剂，其作用主要是有效延长抗原释放时间，使抗原持续刺激机体产生免疫应答反应，并且能够增加抗原表面积，从而有利于巨噬细胞捕获抗原。然而，其缺点也是显而易见的：1)成本高，商品化的优质白油每吨万元以上；2)生产工艺复杂，需要添加多种表面活性剂以及专业的乳化设备；3)抗原配比有限，最大抗原量配比为1:1，多数病毒抗原需要浓缩才能达到要求；4)机体吸收缓慢，应激反应大，易出现组织损伤、生产性能下降甚至死亡等副反应；5)稳定性较差，尤其在夏季高温和长时间储存时易出现水油分层现象。因此，探寻白油佐剂的替代品对于注射型兽用疫苗的发展具有重要意义。

发明内容

本发明的主要目的就在于克服上述现有技术的不足，提供一种兽用注射型灭活疫苗佐剂及其制备方法，所述佐剂由质量比为2.5-7.5:0.5-1.5:91-97的海藻酸钠、松花粉多糖和无菌水组成，用以代替常用的白油佐剂等；本发明的有益效果是：所提供的兽用注射型灭活疫苗佐剂制备工艺简单、成本低、成分简单、剂型稳定，易储存，易于注射，使用方便，作用效果好，无毒副反应，在畜牧业中的开发利用潜力巨大，具有广阔的应用前景。

本发明所采用的海藻酸钠是海藻酸转化成的钠盐，是从褐藻类的海带或马尾藻中提取碘和甘露醇之后的副产物，其分子由β-D-甘露糖醛酸(β-D-mannuronic，M)和α-L-古洛糖醛酸(α-L-guluronic，G)按(1→4)键连接而成，是一种天然多糖类生物高分子聚合物，无毒，具有药物制剂辅料所需的稳定性、溶解性、粘性和安全性，且便宜易得，目前已经在食品工业和医药领域得到了广泛应用。海藻酸钠为白色或淡黄色粉末，几乎无臭无味，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂。海藻酸钠粉末分子量分布比较宽，加入水中后，微粒间的水合作用使海藻酸钠的表面具有粘性，根据分子量大小可分为超高、高、中及低等粘度，其在pH为6-11间的溶液时稳定性好，pH<6时溶液就会析出海藻酸，pH>11时溶液会凝聚，pH＝7时海藻酸钠溶液最为稳定。海藻酸钠作为一种线性多糖，其分子链在溶液中呈线团状分布，具有良好的生物相容性，并能控制药物在特定的部位以特定的速率释放，起到缓释的作用，并且对机体无刺激性，吸收完全。上述特点十分符合疫苗佐剂的要求。然而现有技术中海藻酸钠在医学上多与氯化钙或壳聚糖等反应制备成凝胶或微胶囊，用于包载药物、抗原、细胞、基因、蛋白等，用于药物治疗、口服疫苗和组织修复等，但是尚未有将其作为注射用疫苗佐剂的应用。

松花粉多糖是从马尾松和油松等松科植物的花粉中提取的天然多糖，主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖等单糖组成。松花粉多糖是保持松花粉特效的主要营养成份之一，具有非常高的生物活性，松花粉破壁后多糖提取量显著提高。研究证明，松花粉多糖能活化T细胞、B细胞、巨噬细胞等免疫细胞，有效促进机体分泌抗体和细胞因子，作为疫苗佐剂使用可以提高灭活疫苗和亚单位疫苗的免疫效果，且对机体无毒副作用。此外，松花粉多糖为水溶性多糖，具有非常高的亲水性和粘性，作为灭活疫苗佐剂，可以有效延缓抗原释放。然而，松花粉多糖的价格是限制其使用的最大障碍。在已发表的相关研究中，单独使用松花粉多糖作为疫苗佐剂时，其使用剂量一般大于20mg/mL浓度才能起到良好的免疫增强效果，40mg/mL效果最佳。松花粉的原料成本均价在一百多元每千克，按粗多糖提率10％计算，每百克松花粉多糖(含提取成本)成本在150元左右，那么按40mg/mL浓度配制1L兽用疫苗，仅松花粉多糖佐剂的成本就在60元以上，这个价格远远高于白油佐剂的价格，以致于兽用疫苗生产厂家难以接受。本发明首次将海藻酸钠作为兽用灭活疫苗佐剂，并添加少量的松花粉多糖作为复合佐剂，即可以产生显著的免疫增强效果。不仅为海藻酸钠开拓了一个新用途，还为松花粉多糖在兽用疫苗领域的开发应用提供了可能，大大降低了注射疫苗的成本。

本发明的以下技术方案如下：