[发明专利]一种核糖核酸酶抑制剂包涵体的复性方法

权利要求书

1.一种核糖核酸酶抑制因子包涵体的复性方法，其特征在于，所述方法包括：

(1) 对核糖核酸酶抑制因子包涵体进行变性、溶解；

(2) 对(1)的变性产物进行复性；其中，在复性液中添加核酸酶RNase A，所述的核酸酶RNase A在复性液中的终浓度为10-20 mM；所述的复性液包含：Tris-HCl、无机盐、还原剂；所述Tris-HCl的终浓度为35±15mM，pH为7.5±0.5；所述还原剂为DTT，其终浓度是1±0.5mM；其中，将(1)的变性产物与复性液按照1:(10±5)的体积比例混合；复性时间20±10hr，复性温度4±1℃；和

(3) 对(2)的复性产物进行柱纯化，获得可溶性核糖核酸酶抑制因子。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)之前，还包括以下步骤：

重组表达核糖核酸酶抑制因子，获得含有包涵体的表达宿主；

对表达宿主进行破碎，分离出包涵体。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，表达宿主破碎、裂解后，进行离心获取沉淀，洗涤。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，利用裂解缓冲液裂解，所述的裂解缓冲液包含：Tris-HCl、无机盐、甘油。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，利用洗涤缓冲液洗涤，所述洗涤缓冲液包含：Tris-HCl、无机盐、表面活性剂。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，利用变性液对包涵体进行变性、溶解，其选自尿素、十二烷基肌氨酸钠或SDS的变性剂。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的变性剂是尿素，其终浓度是6±2 M。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的变性剂是十二烷基肌氨酸钠，其终浓度是1±0.5%(w/v)。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的变性剂是SDS，其终浓度是2±1%(w/v)。

10.如权利要求1或8所述的方法，其特征在于，所述的核酸酶RNase A在复性液中的终浓度为12～18 mM。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，将(2)的复性产物上样至纯化柱，利用洗涤缓冲液洗去与核糖核酸酶抑制因子结合的核酸酶RNase A；然后，利用梯度洗脱缓冲液进行梯度洗脱，得到纯化的可溶性核糖核酸酶抑制因子。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的洗涤缓冲液包含：NaAc/HAc、无机盐、还原剂。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述的NaAc/HAc的终浓度为35±15mM，pH为5.0±0.5。

14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述的无机盐的终浓度是300±15mM。

15.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述的还原剂的终浓度是1±0.5mM。

16.权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的梯度洗脱缓冲液包含Tris-HCl、无机盐、甘油、还原剂。

17.权利要求16所述的方法，其特征在于，所述的Tris-HCl终浓度为35±15mM，pH为7.5±0.5。

18.权利要求16所述的方法，其特征在于，所述的无机盐的终浓度是50±15mM。