[发明专利]一种甘薯紫外光受体UVR8基因及其克隆方法

权利要求书

1.一种甘薯紫外光受体UVR8基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQ.NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的甘薯紫外光受体UVR8基因，其特征在于：用于克隆所述甘薯紫外光受体UVR8基因的引物组序列如下：

3.如权利要求2所述的甘薯紫外光受体UVR8基因的克隆方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)cDNA第一链的合成

对样本进行处理，抽提样本RNA，采用Thermo Fisher RevertAid First Strand cDNASynthesis Kit合成甘薯cDNA第一链；

(2)UVR8保守序列的同源克隆

根据NCBI公布的植物UVR8序列,采用codehop方法设计简并引物F1、R1，以步骤(1)得到的甘薯cDNA为模板进行扩增，得到DNA片段回收纯化后,连接到pMD18-T载体,转化鉴定后测序，得到核心基因片段；

(3)UVR8 3’端的扩增

根据已知植物的UVR8基因片段和3’RACE原理,以步骤(1)得到的甘薯cDNA为模板进行COP1 3’端的巢式扩增，设计第一对PCR引物为F3和oligodT18，巢式引物为F2、F3，取第一轮PCR产物作为第二轮PCR扩增的模板，将扩增到的DNA片段连接到T载体、转化鉴定后测序，得到3端序列；

(4)UVR8 5’端的扩增

按照5’RACE原理，设计引物5'oligo dG代替随机引物，采用Thermo Fisher RevertAidFirst Strand cDNA Synthesis Kit，以步骤(1)同步骤处理的样本RNA为模板，利用M-MuLV逆转录酶合成甘薯cDNA第一链；然后以该cDNA为模板进行扩增，设计特异性引物5'adapter、R2，将扩增到的DNA片段连接到T载体、转化鉴定后测序，得到5端序列；

(5)序列拼接

将所述核心基因片段、3端序列和5端序列进行序列比对，拼接，得到甘薯UVR8基因序列。

4.根据权利要求3所述的甘薯紫外光受体UVR8基因的克隆方法，其特征在于：步骤(2)所述植物UVR8序列选自但不限于以下其中一种植物：拟南芥、番茄、烟草、马铃薯。

5.根据权利要求3所述的甘薯紫外光受体UVR8基因的克隆方法，其特征在于：所述核心基因片段的核苷酸序列如SEQ.NO.1所示。

6.根据权利要求3所述的甘薯紫外光受体UVR8基因的克隆方法，其特征在于：所述3端序列如SEQ.NO.2所示。

7.根据权利要求3所述的甘薯紫外光受体UVR8基因的克隆方法，其特征在于：所述5端序列如SEQ.NO.3所示。