[发明专利]一种富含芪类化合物食药真菌发酵产物的制备方法

说明书

本发明公开了一种富含芪类化合物食药真菌发酵产物的制备方法，包括：将桑黄种子液接种于添加有外源物的固体培养基中培养，将培养产物干燥、粉碎后得外源物固体发酵培养物；所述外源物选用花生、桑葚果、葡萄、首乌、大黄中的一种或者两种以上；再将桑黄种子液接种于添加有外源物固体发酵培养物的液体发酵培养基中培养一段时间，加入冷激蛋白，然后继续培养一段时间后，终止发酵，得到富含芪类化合物的桑黄发酵产物。本发明利用外源物中含有少量的白藜芦醇，结合芪类化合物合成代谢途径的特点，经桑黄固体发酵和液体发酵工艺，并在特定的发酵阶段添加冷激蛋白，能有效增加生物合成芪类化合物的量，为得到富含芪类化合物的产物提供了新的途径。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种富含芪类化合物食药真菌发酵产物的制备方法。

背景技术

桑黄(Phellinus igniarius)属担子菌亚门，层孔菌纲，锈革孔菌科，针层孔菌属。桑黄菌提取物在抑制癌细胞转移和防止癌症手术后复发等的临床应用中具有显著效果，是目前国际公认的生物治癌药剂中有效率最高的一种食药真菌。

由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约，造成桑黄在自然界中形成子实体稀少，特别是形成可用子实体需要多年。而且人工栽培极其困难，培养条件苛刻，且生长周期长达3-4年，难以满足日益膨胀的市场需要。采用桑黄液体发酵的方法生产桑黄药用活性成分因为具有生产周期短、节约劳动力以及受外部环境影响小等优点被认为是一种有效的方法。目前，国内外对桑黄菌丝体培养生产活性药用成分研究和工艺应用主要集中在发酵条件及产物提取分离等层面上，整体发酵水平不高。

芪类化合物是具有1,2-二苯乙烯骨架的单体及其低聚体的总称。芪类化合物及其低聚物由于化学结构的复杂性和多样的生物活性，正受到生物界和化学界越来越多的重视。芪类化合物既存在于首乌、虎杖、大黄、藜芦等中草药中，也存在于葡萄、花生、桑葚等食用植物中，具有很多生理及诸多生理活性(赵艳敏,郭燕,尚冀宁.芪类化合物的分布和生理活性[J].化工科技,2015,23(1):77-80.)。

近年来，报道的芪类化合物有白藜芦醇、白皮杉醇、虎杖苷等。芪类化合物的生理活性，除早期发现的抗菌活性外，近年来又发现一些芪类化合物有抗肿瘤作用、杀虫作用、抗病毒作用、抗炎作用、抗老年痴呆、扩张冠状血管及降压作用、抗变态反应、保护肝细胞和降血脂等多种生理活性。芪类化合物属于植物的应激产物，一般在植物中含量普遍较低，目前芪类化合物多从植物中获得，但单纯依靠从植物中获得芪类化合物将耗费大量的植物资源，成本高且不环保。利用桑黄等食药用菌，制备富含白藜芦醇、白皮杉醇等芪类化合物的发酵产物的技术方法还未见报道。

冷激蛋白(cold shock domain proteins，CSPs)是广泛存在于生物体中的一种应激蛋白。冷激蛋白在细菌、植物与动物中均有发现，是一类高度保守的核酸结合蛋白，其通过RNA分子伴侣活性参与转录、翻译、生长发育及逆境胁迫应答等细胞生理活动(ChaikamV,Karlson DT(2010),Comparison of structure,function and regulation of plantcold shock domain proteins to bacterial and animal cold shock domainproteins.BMB Rep,43(1):1-8.)。冷激蛋白的其它用途还暂未见报道，有待进行一些应用性的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种富含芪类化合物食药真菌发酵产物的制备方法，该方法操作简单，转化率高，绿色环保，为得到富含芪类化合物的产物提供了新的途径。

本发明发现冷激蛋白有利于食药真菌发酵过程中芪类化合物的生物合成。本发明利用花生、桑葚果、葡萄、首乌、大黄等植物中含有少量的白藜芦醇，结合芪类化合物合成代谢途径的特点，经桑黄固体发酵和液体发酵工艺，并在特定的发酵阶段添加冷激蛋白，能有效增加生物合成抗氧化、抗肿瘤等活性更强的维尼非林、紫檀芪等多种聚合衍生物芪类化合物的含量。