[发明专利]人可溶性糖蛋白130单克隆抗体及编码基因、制备方法与应用

说明书

本发明公开了人可溶性糖蛋白130单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的碱基序列和氨基酸序列，本发明还公开了人可溶性糖蛋白130单克隆抗体的编码基因、应用，以及人可溶性糖蛋白130单克隆抗体的制备方法。本发明的人可溶性糖蛋白130单克隆抗体在Western‑blotting的结果上具有特异性好、敏感度高、纯度高的优点，能够为体内sgp130和gp130蛋白的表达水平提供较为准确的检测手段。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及人可溶性糖蛋白(sgp130)单克隆抗体及编码基因、制备方法与应用

背景技术

gp130是一个重要的信号分子，几乎表达于体内各种组织细胞上，参与着体内一些重要的生理过程，其主要的作用之一就是利用胞外区结合IL-6-IL-6R复合物，向细胞内传导信号。通常情况下人血清中含有的IL-6量很少，但在炎症、感染和患有肿瘤或癌症的情况下其含量会大幅上升。在人类的血清中，除了有gp130以外，还有可溶型的gp130(sgp130)，sgp130是gp130的胞外区片段，可能是作为复合物IL-6-IL-6R的拮抗剂存在于动物体内。研究发现，正常人血浆中sgp130的含量可达410ng/ml。体内的sgp130保留着与配体结合的能力，它可以阻断IL-6的反式信号途径，从而减轻炎症反应的发生，在一定程度上可以抑制肿瘤和某些癌症的发展。检测体内sgp130蛋白的表达对于研究治疗肿瘤和癌症的药物具有重要作用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种人可溶性糖蛋白(sgp130)单克隆抗体及其编码基因。

人可溶性糖蛋白130单克隆抗体，所述抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述重链可变区的碱基序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述轻链可变区的碱基序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

所述的人可溶性糖蛋白130单克隆抗体，其为如下A或B所示的蛋白质：

A：重链可变区的碱基序列和氨基酸序列分别由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列组成，且轻链可变区的碱基序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示列组成的蛋白质；

B：将SEQ ID NO.1-4所示的序列经过一个或几个碱基/氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由A衍生的蛋白质。

所述人可溶性糖蛋白130单克隆抗体的编码基因，为如下1)-3)中任一所示的DNA分子：

1)重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，且轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的DNA分子：

2)与1)限定的DNA序列杂交且编码权利要求1或2所述抗体的DNA分子；

3)与1)限定的DNA分子具有90％以上的同源性且编码权利要求1或2所述抗体的DNA分子。

含有本发明所述人可溶性糖蛋白130单克隆抗体的重组表达载体或表达盒或转基因细胞系或重组菌也是本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供人可溶性糖蛋白130单克隆抗体的应用，所述抗体用于制备特异性结合人可溶性糖蛋白130的产品，或者用于制备治疗癌症的药物，或者，所述抗体用于检测样品中是否含有sgp130。

本发明所述的人可溶性糖蛋白130单克隆抗体的制备方法，采用如下步骤：

1)利用分子克隆的手段构建人可溶性糖蛋白(sgp130)的重组质粒，该重组质粒具有权利要求4所述的编码基因的DNA分子序列，转化至宿主菌Rosseta(DE3)中进行蛋白表达，纯化后，获得高纯度的人可溶性糖蛋白(sgp130)蛋白；

2)将制备好的sgp130抗原腹腔注射至Balb/c小鼠体内；