[发明专利]一种高渗透性植物免疫诱抗剂的制备方法

说明书

本发明涉及植物疫苗技术领域，具体而言涉及一种高渗透性植物免疫诱抗剂的制备方法。一种高渗透性植物免疫诱抗剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将壳聚糖进行降解，过滤，获得原料a；（2）将1‑正十二烷基氮杂环庚‑2‑酮用无水乙醇溶解，获得原料b；（3）将脂肪醇聚氧乙烯醚配制成水溶液，获得原料c；（4）将原料a、原料b、原料c加入到水中混合，在超声波辅助下于35~50℃水浴加热10~12小时，得到高渗透性植物免疫诱抗剂。本发明具有能够顺利通过植物角质层屏障，易被植物吸收利用的优势。

技术领域

本发明涉及植物疫苗技术领域，具体而言涉及一种高渗透性植物免疫诱抗剂的制备方法。

背景技术

植物免疫诱抗剂也叫植物疫苗，是继人用疫苗、动物疫苗后，疫苗工程技术出现的新领域，也是国际上生物农药创制较为热门的研究方向。

当植物受到外界刺激或处于逆境条件时，能够通过调节自身的防卫和代谢系统产生免疫反应，植物的这种防御反应或免疫抗性反应，可以使植物延迟或减轻病害的发生和发展，减少化学农药与化学肥料的使用量，降低农产品残留。植物免疫诱抗剂对农作物病虫害却没有直接的杀灭作用，而是由外源生物或分子通过诱导或激活植物所产生的抗性物质，对某些病原物产生抗性或抑制病菌的生长。当其施用在农作物上后，通过诱导农作物产生抵御或防控农作物病虫害的物质，从而达到防治病虫害的目的。

其中以壳聚糖制备的植物免疫诱抗剂因其主要成分的分子量较大，不易透过植物的角质层而被高效吸收利用。因此，目前生产上需要开发一种能够顺利通过植物角质层屏障，易被植物吸收利用的壳聚糖植物免疫诱抗剂。

发明内容

为了解决上述问题，提供一种能够顺利通过植物角质层屏障，易被植物吸收利用的壳聚糖植物免疫诱抗剂，本发明采用以下技术方案：

一种高渗透性植物免疫诱抗剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）将壳聚糖进行降解，过滤，获得原料a；

（2）将1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮用无水乙醇溶解，获得原料b；

（3）将脂肪醇聚氧乙烯醚配制成水溶液，获得原料c；

（4）将原料a、原料b、原料c加入到水中混合，在超声波辅助下于35~50℃水浴加热10~12小时，得到高渗透性植物免疫诱抗剂。

首先，以壳聚糖制备的植物免疫诱抗剂具有良好的作用效果但是存在有主要成份粒子过大，不能很好地被植物所吸收，本发明采用了1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮用无水乙醇的混合溶液，1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮可以起到加强渗透的作用，提高了本发明植物免疫诱抗剂的作用效果，而且本发明采用了脂肪醇聚氧乙烯醚作为表面活性剂，加强了渗透剂和壳聚糖降解产物之间的混合效果，使得，1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮可以更好地发挥作用。

作为优选，在所述的步骤（1）中所述的壳聚糖采用以下方法降解：

a.壳聚糖溶解在缓冲溶液中，充分搅拌制成壳聚糖溶液；

b.在步骤(1)制得的壳聚糖溶液中加入质量为壳聚糖质量的0.5-3％的壳聚糖酶，搅拌均匀后将壳聚糖溶液倒入反应瓶中，再将反应瓶放入微波反应器中，并在反应瓶中通入氮气，控制温度小于65℃、微波功率100~1000W条件下进行降解反应10-180min降解反应结束后微波升温至100℃使壳聚糖酶灭活，灭活反应时间为10-15min；

c.用浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液将经步骤b反应后的溶液pH值调节至7-8，再经过滤除去沉淀，将所得滤液用透析法除去盐离子后冷冻干燥。

首先本发明采用了微波反应消解壳聚糖的方案，可以加快壳聚糖的消解速度，减少时间成本，也可以增加消解的程度，另外本发明采用了透析法除去了盐离子，可以减少盐离子对植物的干扰，提高本发明的作用效果。