[发明专利]鼠源GPR35高通量筛选模型的构建方法及应用在审
| 申请号： | 201711354062.2 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN109929805A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 梁鑫淼;王纪霞;张秀莉;张鹏宇;徐芳芳;侯滔;周晗;魏来;曲腊腊 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鼠源 高通量筛选模型 构建 激动剂和拮抗剂 药理学 高通量筛选 检测灵敏度 生物学功能 药理学特征 孤儿受体 检测结果 潜在药物 筛选模型 细胞整合 重要意义 高活性 无标记 配体 通量 转染 应用 筛选 细胞 伤害 发现 研究 | ||
1.鼠源GPR35高通量筛选模型，其特征在于：基于鼠源GPR35稳转细胞系，利用无标记细胞整合药理学技术，借助于探针分子，建立鼠源GPR35筛选模型的特征信号谱图。
2.一种按照权利要求1所述的鼠源GPR35高通量筛选模型的构建方法，其特征在于：在最优转染条件下，在CHO-K1细胞上转染鼠源GPR35质粒，通过抗生素筛选、单克隆挑选、扩增培养及功能测定获得稳定表达鼠源GPR35受体的细胞系,利用无标记细胞整合药理学技术，借助于探针分子，建立鼠源GPR35筛选模型的特征信号谱图。
3.按照权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述的最优转染条件包括CHO-K1细胞在直径10cm培养皿的接种密度为1.5×106个，细胞培养液的体积为10mL，鼠源GPR35质粒和Lipo2000转染试剂的比例为1：2-5(优选比例为1：3)，使用鼠源GPR35质粒的量为4～10μg，G418抗生素浓度为400μg/mL。
4.按照权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述的利用无标记细胞整合药理学技术是基于无标记的共振波导光栅(RWG)生物传感器将药物导致的细胞内成分的动态再分布现象转化为整体的、动态的响应信号，称为动态质量重置(DMR)响应信号，此信号为波长变化的响应值(pm)，代表了靶点及其激活通路在细胞水平的整体响应；基于此技术构建鼠源GPR35高通量筛选模型的方法条件包括以下方面：稳转鼠源GPR35的CHO-K1细胞在384孔板中接种密度为1.5×104个/孔，细胞培养液的体积为40μL/孔，接种后细胞培养时间为12h。
5.按照权利要求2所述的构建方法，其特征在于：探针分子为对鼠源GPR35受体有激动作用的犬尿酸和敏喘宁，其中犬尿酸的浓度范围为0.391μM～100.000μM，敏喘宁的浓度范围为0.002μM～1.250μM。
6.按照权利要求5所述的构建方法，其特征在于：犬尿酸和敏喘宁分别作用于稳定表达鼠源GPR35受体的CHO-K1细胞后产生的实时DMR信号特征谱，检测时间范围为10min～60min。
7.一种按照权利要求所述的鼠源GPR35高通量筛选模型的应用，其特征在于：鼠源GPR35高通量筛选模型用于筛选鼠源GPR35的激动剂和拮抗剂。
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