[发明专利]一种注射用细胞色素C的制备方法

说明书

细胞色素是包括多种含铁卟啉基团的电子传递蛋白的总称,只存在于需氧细胞中,以心肌和醇母细胞含量较高。细胞色素C(cyto‑chrome C)是细胞色素的一种。是呼吸链中的一个重要成员。每分子细胞色素C含有一个血红素和一条多肽链。细胞色素的氨基酸顺序及含量都有一定差异。一般氨基酸残基数目在103～111之间;其等电点为10.7,含铁量为0.38％～0.43％,分子量为12000～13000。本文介绍一种新的细胞色素C的制备方法。

技术领域

本发明属于化工技术领域，尤其是涉及到细胞色素C的制备方法。

背景技术

细胞色素C是一种含铁卟啉的蛋白质，是生物氧化过程中的电子传递体。其作用原理为在酶存在的情况下，对组织的氧化、还原有迅速的酶促作用。通常外源性细胞色素C 不能进入健康细胞，但在缺氧时，细胞膜的通透性增加，细胞色素C便有可能进入细胞及线粒体内，增强细胞氧化，提高氧的利用。

目前市售细胞色素C注射液用于组织缺氧的急救和辅助用药，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、新生儿窒息、严重休克缺氧、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难、高山缺氧、脑缺氧、心脏疾病引起的缺氧等。现有细胞色素C提取方法是用硫酸水溶液提取，此法提取条件较剧烈，耗时长，而且收率较低。

发明内容

本发明的目的在于改进已有技术的不足而提供一种以哺乳动物心肌为原料，采用硫酸铝溶液提取法制备，得到细胞色素C，本发明具有方法成本低、步骤简单、提取条件温和、引入杂质少、反应物无污染、适合工业化大生产的特点。本发明的目的是这样实现的，一种细胞色素C的制备方法，其特点是以哺乳动物 心肌为原料，采用硫酸铝溶液提取法制备，得到细胞色素C。为进一步实现本发明的目的，可以是用硫酸铝溶液一次或多次提取，提取时硫酸铝的浓度控制在0.2_10%，硫酸铝溶液的体积控制在l-5倍心肌体积，提取pH值控制在 3.5-6.5，反应温度控制在0°C -3°C，提取时间控制在2-4小时。 为了更进一步实现本发明的目的，可以是所述的制备方法是，将心肌绞碎，加入 1-5倍心肌体积的硫酸铝溶液，硫酸铝溶液的浓度为0. 2-10%，控制pH值在3.5-6.5之间，控制温度在0°C -3°C之间，提取2-4h，再经过滤，心渣可再经硫酸铝溶液提取，提取液经沸石吸附，洗脱，盐析，超滤除盐，冻干，得到细胞色素C。 本发明涉及的技术方法是以市售的哺乳动物心肌为原料，采用硫酸铝溶液提取法制备，得到细胞色素C。该方法成本低，步骤简单，提取条件温和，引入杂质少，反应产物无污染，通过对反应时间、反应温度、反应pH值和硫酸铝的浓度控制，可得到目标产物，适合工 业化大生产。

具体实施方式

实施例1

细胞色素C制备方法，将5kg猪心绞碎，加入15L浓度为2X硫酸铝溶液， pH值控制在3.5，降低温度至0°C ，提取2小时，再经过滤，得到的提取液经沸石吸附，洗脱，盐析，超滤除盐，冻干，得到产品1.0g。

实施例2

将25kg牛心绞碎，置于夹层反应罐中，加入50L浓度为3%硫酸铝溶液， pH值控制在6.5，控制温度至3°C ，提取3小时，再经过滤，心渣可再经硫酸铝溶液按前述方法 分别提取2次，得到的所有提取液经沸石吸附，洗脱, 盐 析，超滤除盐，冻干，得到产品5.2g。

以上所述，仅是本发明的较佳实施案例而已，并非是对本发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。