[发明专利]一种快速检测腐食酪螨的LAMP检测装置及其应用

说明书

一种快速检测腐食酪螨的LAMP试纸条，包含SEQ1‑4的引物组，提供一种快速检测方法，可以在60min内完成反应，样本灵敏度高，可检测到0.5ng/μLDNA无需反转录，即使样品含有1头腐食酪螨，也可以检测出来。本发明的检测方法基因序列的特异性高，并且在引物的5’添加了生物素降低了样品的假阳性，整个反应在封闭容器内完成，不需要开盖，防止污染，检测结果直观准确。只需保温杯或水浴锅即可完成反应，该方法操作简单、成本低廉，反应结果易于观察，特异性高，可实现农业生产或粮食储藏中腐食酪螨危害田间检测，易于大范围的应用推广。

技术领域

本发明属于试纸条检测领域，具体为一种快速检测腐食酪螨的LAMP检测装置及其应用。

背景技术

腐食酪螨（Tyrophagus putrescentiae）属于蛛形纲（Arachinida）、蜱螨亚纲（Acari），真螨目（Acariformes）粉螨亚目 （Acaridida），是世界性分布的仓储害螨，寄主范围广，包括大米、麸皮、小麦、花生、奶酪、干果和蜜饯、面粉等各种储藏物及各类中药材，也是食用菌栽培中常见的害螨。还携带并传播病原菌，造成储藏物霉变，引起人类过敏性皮炎、肺螨病、肠螨病等。我国是食用菌生产大国也是出口大国，螨虫是危害食用菌的一个重要类群。在栽培中，食用菌菌种培养期温度控制在22～23℃、相对湿度在60～80%，虽适宜食用菌菌丝的快速生长，但温暖潮湿的环境为螨虫的滋生提供有利条件，螨虫成为食用菌栽培中的隐患。

螨虫既取食菌丝又为害子实体，寄主受害症状与病害相似，给螨虫的防治和鉴定工作带来困难，加之螨虫通常从栽培袋袋口或出菇（耳）孔处侵染袋（瓶）内，钻蛀到基质内取食为害，给鉴定工作带来很大的挑战。目前，鉴定农业害螨的方法主要是电镜观察法和DNA指纹图法等。电镜观察法虽然经典，但是要求具有相关专业背景，且操作繁琐、花费时间长，且较难区分同属内形态相近的不同种，如腐食酪螨与同食酪螨（T. communis）等；利用DNA指纹图谱的PCR方法，具有很大优势，但需要对扩增产物进行凝胶电泳后测序确定信息，需要2~3天完成鉴定，花费时间长，费用较高，其中用到的核酸EB染料具有致癌性，对人造成潜在安全。尘螨属于粉螨亚目中的屋尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus）和粉尘螨（D．farinae）是最主要的室内过敏原之一，能诱发哮喘、过敏性鼻炎和湿疹等过敏性疾病的重要变应原。临床上，一般采用酶免疫法通过筛查患者血清或血浆中是否还有尘螨过敏源进行定性和定量检测。但，这种方法不适用于农业害螨。因此，迫切需要建立一种新型、简便、可靠的腐食酪螨检测技术。

近年，环介导等温扩增技术（LAMP技术）结合可视化染料建立的方法与其它方法相比具有很大的优势，首先不需要操作人员的具有较强的专业水平，操作方法简单，并且简化了操作程序、降低了样品交叉污染，最后根据试纸条颜色差异和强弱，就可判断是否含有有害生物，在操作性和时效性上具有巨大的优势。只用肉眼观察到试纸条条带，就能鉴定扩增与否，而不需要繁琐的电泳和染色过程，也不需要开盖添加染料增加结果的假阳性。同时，LAMP 反应不需要PCR 仪和昂贵的试剂，有着广泛的应用前景。

但是，目前尚未有利用环介导等温扩增（LAMP）对腐食酪螨进行检测的报道。

发明内容

为解决LAMP 反应不需要PCR 仪和昂贵的试剂，但是目前尚未有利用环介导等温扩增（LAMP）对腐食酪螨进行检测的报道的缺陷，本发明提供一种快速检测腐食酪螨的LAMP检测装置及其应用。

本发明根据LAMP 技术原理，以腐食酪螨GR基因作为模板，通过对反应条件和试纸条检测方法进行研究，建立腐食酪螨的LAMP试纸条快速检测技术。

一种快速检测腐食酪螨的LAMP的检测装置，包含核酸检测试纸条和LAMP检测引物组，所述LAMP检测引物组具体如下：

F3 ：5'-GATCTGCGAACTGGTGGAC-3' ；