[发明专利]一种用于制备抑制弓形虫增殖的小分子抑制剂的应用

说明书

本发明公开了一种用于制备抑制弓形虫增殖的小分子抑制剂的应用，利用Alphascreen实验初步选出11个小分子抑制剂和一个小分子促进剂，这12种药物都是临床用药。在细胞水平上对这12种药物进一步筛选，空斑实验证实NVP‑AEW541明显抑制了弓形虫的增殖并通过胞内增殖实验确定了它对弓形虫的EC50值在1.27μM左右。AlphaScreen竞争性抑制实验评估NVP‑AEW541抑制TgAtg8‑TgAtg3相互作用的IC50值为11.01μM。利用CCK8实验证明了该药抑制宿主细胞生长的IC50值为34.359μM，远大于该药对虫体的EC50值，说明NVP‑AEW541是一个低毒且高效的抗弓形虫药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其是一种用于制备抑制弓形虫增殖的小分子抑制剂的应用。

背景技术

目前，弓形虫(Toxoplasma gondii)是专性寄生于几乎所有有核细胞内的一种重要的人畜共患病原。当感染人群免疫力低下时，虫体可诱发炎症反应，严重可致死亡。妇女孕期首次感染可发生流产、死胎或畸型等。畜牧动物感染弓形虫易出现流产、肉/奶品质量下降，给畜牧业带来巨大经济损失。此外，弓形虫感染的动物食/制品是该病重要传播途径。随着我国人群饮食习惯的改变、饲养宠物人数增多以及“二胎政策”的全面放开，弓形虫病的防控在公共卫生和畜牧生产上均有重要意义。

目前治疗和预防弓形虫的药物主要是乙胺嘧啶和磺胺嘧啶，然而，这些药物都有副作用如:中性粒细胞减少、血小板严重下降、白细胞减少、血清肌酐和血清肝酶升高、超敏反应等。另外，临床上治疗弓形虫的其他药物如阿奇霉素，克拉霉素、螺旋霉素、阿霉素等耐受性差且对缓殖子没有作用。在法国的临床试验中，有24％的血清阳性的怀孕女性是采用螺旋霉素、甲氧嘧啶和磺胺多辛联合用药来保护婴儿不被弓形虫感染。在怀孕早期，螺旋霉素单一疗法可以有效预防产前传播。然而超过50％的螺旋霉素患者在血液中仍然存在弓形虫DNA。因此，寻找一种高效、低毒药物是弓形虫病防治工作中亟需解决的问题。

本发明在前期研究中(陈弟，林佳鑫，刘阳阳，李相志，陈高帜，聂琴琴，华倩倩，胡昕和谭峰；2016；弓形虫TgAtg8-TgAtg3相互作用的鉴定；热带医学学报v.153,p.79-85；(Chen,D.,J.Lin,Y.Liu,X.Li,G.Chen,Q.Hua,Q.Nie,X.Hu,and F.Tan,2016,Identification of TgAtg8-TgAtg3interaction in Toxoplasma gondii:Acta Trop,v.153,p.79-85.))证实弓形虫自噬相关蛋白(T.gondii autophagy-related protein,TgAtg)8与TgAtg3之间存在特异的蛋白相互作用关系。以此为靶点，筛选获得一个小分子药物，发现其既可显著抑制虫体增殖、延长弓形虫感染小鼠的存活时间，而且对宿主无明显毒副作用。上述结果提示：TgAtg8-TgAtg3蛋白相互作用是一个具有潜在应用前景、特异性较高的药物靶点。

然而，由于该小分子药物来源局限、成本过高、无自主知识产权等缺陷，并不适合作为后续研究与药物研发。药物研发是一个周期长、投入费用高的系统工程。相比新药研发，采用“老药新用”策略可以缩短研发周期、降低研发成本，同时具有副作用小等优点。例如：利用抗疟疾药物氯奎宁抑制癌症的侵袭转移、用于风湿性关节炎药物“金诺芬(Auranofin)”的抗溶组织内阿米巴的效力是甲硝唑的十倍多。

目前，获美国食品药品管理局(FDA)批准、可用于临床治疗的共1751个小分子药物，而抗弓形虫药物应满足膜通透性好、特异性高、对宿主细胞毒性小的优点。小分子药物主要是合成药物，通常指分子量小于1 000的有机化合物。在常用药物数据库中，小分子药物的数量占到了98％，而生物技术药物只占2％。它进入细胞，与特定的生物分子(即靶标)相结合，通过靶标影响整个细胞及组织的功能，起到特定的治疗或预防作用，具有使用广泛、理论成熟等优势。小分子药物结构稳定，可通过直接口服达到预期的疗效，在临床应用上具有使用方便，药效持久等优势。

发明内容