[发明专利]一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法

说明书

本发明公开了一种ASE‑HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，该方法提取效果好且耗时短、重复性好，检测精度高。属于化学检测领域。该方法采用ASE法萃取黄芩粉末，并收集甲醇萃取液；采用HPLC法测定甲醇萃取液中黄芩苷的含量。本发明可以代替药典方法对黄芩中的黄芩苷进行提取以及含量测定。

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法。

背景技术

2010年版药典方法中记载的制备供试品溶液的方法为：取本品中粉约0.3g，精密称定，加70％甲醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

该方法回流时间长，且对技术人员的专业水平要求较高。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，该方法提取效果好且耗时短、重复性好，检测精度高。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定黄芩中黄芩苷含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法萃取黄芩粉末，并收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中黄芩苷的含量。

优选地，所述的步骤1依次包括下述子步骤：

步骤S1：将黄芩样品粉碎，过筛，取0.3g与1g硅藻土混合；

步骤S2：将所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用70％甲醇萃取，结束后，将萃取液用70％甲醇定容至50ml，离心，取上清液，即得。

优选地，步骤S3所述的萃取参数为：压力为1500psi，温度为120℃，萃取时间为5min，循环次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

优选地，步骤S2所述的ASE萃取池的体积为10ml。

优选地，步骤S3所述的离心参数为：离心速度为15000r/min，离心时间为3min。

优选地，步骤1所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo Syncronis C18；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为甲醇-0.1％磷酸；检测波长为280nm。

优选地，所述的色谱柱规格为：3*100mm，3μm。

优选地，所述的流动相为体积比等于47：53的甲醇-0.1％磷酸。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用70％甲醇回流3小时。本实验选用甲醇、甲醇、70％甲醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示甲醇与甲醇提取后黄芩苷含量与2015年版《中国药典》含量下降，原因可能是黄芩苷的极性大，故采用与药典一致的提取溶剂70％甲醇。

70％甲醇的熔沸点较高，快速溶剂萃取(以下简称ASE)提取原理：A:提高温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；B:萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态(液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力)。故我们选择采用120℃，提取5min，提取3次，即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度120℃，提取时间5min，提取次数3次。