[发明专利]一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法

权利要求书

1.一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，依序由细胞复苏及摇瓶扩培步骤、罐扩培步骤和罐生产步骤组成，其特征在于，

所述罐生产步骤在一次性生物反应器中进行；且

在泡沫产生高峰期，控制排气流量为排气流量的80-100％；并添加质量百分比浓度为0.01-0.1％的消泡剂；且按罐生产步骤之细胞接种后细胞培养液总体积140升计算，消泡剂的添加速度为每小时2.5-10毫升。

2.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，对罐生产步骤的一次性生物反应器进行压力预警，压力警戒上限为42mbar；及在泡沫产生高峰期内，按罐生产步骤之细胞接种后细胞培养液总体积140升计算，每天24小时内的碱添加量不超过2000毫升。

3.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，在泡沫产生高峰期的到达细胞密度峰值前的时间段，消泡剂的添加速度从每小时2.5毫升到每小时10毫升之间递增；在泡沫产生高峰期的过了细胞密度峰值后的时间段，消泡剂的添加速度从每小时10毫升到每小时2.5毫升之间递减。

4.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，所述一次性生物反应器采用Xcellerex-XDR型一次性生物反应器，其一次性生物反应袋的顶部具有两个通气接口，其中一个通气接口连接消泡剂添加组件，另一个通气接口连接泡沫引流组件。

5.根据权利要求4所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，所述消泡剂添加组件主要由一个三通、一个排气滤器、一个内置消泡剂的容器和蠕动泵组成；所述三通的第一接口与所述一次性生物反应袋的一个通气接口连接；所述排气滤器与所述三通的第二接口连接；所述蠕动泵的输出端与所述三通的第三接口连接；所述内置消泡剂的容器与所述蠕动泵的输入端连接。

6.根据权利要求4或5所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，所述泡沫引流组件主要由抽气装置、无菌密闭容器和排气滤器组成；所述抽气装置的输入端通过连接管与所述一次性生物反应袋的另一个通气接口连接，其输出端通过连接管与所述无菌密闭容器连接；所述排气滤器的输入端通过连接管与所述无菌密闭容器连接；所述无菌密闭容器内盛装少量消泡剂。

7.根据权利要求6所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，所述抽气装置为蠕动泵；所述抽气装置与一次性生物反应袋之间的连接管为硅胶管或C-flex管；及有一不锈钢中空管，以可滑动方式设置在所述抽气装置与一次性生物反应袋之间的连接管中，且该不锈钢中空管的一端经所述一次性生物反应袋的另一个通气接口延伸入所述一次性生物反应袋中，其另一端留置于所述抽气装置与一次性生物反应袋之间的连接管中。

8.根据权利要求7所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，所述不锈钢中空管的另一端设有套管，所述不锈钢中空管的另一端通过该套管留置于所述抽气装置与一次性生物反应袋之间的连接管中。

9.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞大规模生产培养方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞主要是适用于药用重组蛋白生产的主流哺乳动物宿主细胞，包括CHO DG44细胞、CHO-K1细胞、CHO DUXB-11细胞和SP2/0细胞。