[发明专利]一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法

权利要求书

1.一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法，其特征在于，该方法采用老熟雌蛹在羽化前1～2天注射浓度为0.5～2μmoL/L的蛋白酶体抑制剂MG132；羽化后摘取处女蛾的腹部，获得未受精蚕卵；未受精蚕卵浸入46℃水浴中，热激诱导15～18分钟；诱导后未受精卵进行保护，然后催青至孵化。

2.根据权利要求1所述的一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法，其特征在于，老熟雌蛹的处理方法为：上蔟结茧后，常规保护10天后，削茧取蛹并鉴别雌雄；健康雌蛹倒入新鲜配制的0.25％漂白粉溶液中，浸洗2分钟，捞出室温晾干后，常规保护至羽化前1～2天。

3.根据权利要求1所述的一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法，其特征在于，注射蛋白酶体抑制剂MG132的方法为：蛋白酶体抑制剂MG132粉剂用DMSO溶解后，配制成抑制剂储存液，使用前用1×PBS稀释到合适的浓度；按每蛹20微升量，注射雌蛹腹部,使抑制剂终浓度为0.5～2μmoL/L，常规保护至羽化。

4.根据权利要求1所述的一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法，其特征在于，未受精蚕卵获取方法为：摘取羽化后在室温下保持8小时处女蛾的腹部，经室温自来水冲洗后，在14目塑料网纱上搓揉，剥离出未受精蚕卵并去除组织杂质，再用室温自来水冲洗干净、室温晾干后，备用。

5.根据权利要求1所述的一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法，其特征在于，热激诱导为方法为：将晾干后未受精卵装入40目尼龙网纱小袋中封口后，浸入46℃水浴中，热激诱导15～18分钟后，转入室温自来水中漂洗3分钟，室温晾干。

6.根据权利要求1所述的一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法，其特征在于，诱导后未受精卵的保护方法为：将晾干后的未受精卵放置在16℃、湿度85％的培养箱中96小时，取出后在室温下放置30分钟，二化性品种以46℃、比重1.075的盐酸水溶液浸没5分钟，室温自来水冲洗2分钟，晾干后，在25℃、80％湿度条件下催青至孵化；多化性品种直接催青至孵化。

7.根据权利要求1所述的一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：

1)老熟雌蛹的处理：上蔟结茧后，常规保护10天后，削茧取蛹并鉴别雌雄；健康雌蛹倒入新鲜配制的0.25％漂白粉溶液中，浸洗2分钟，捞出室温晾干后，常规保护至羽化前1～2天；

2)抑制剂配制及蛹注射：用DMSO溶解蛋白酶体抑制剂MG132粉剂，配制成抑制剂储存液，使用前用1×PBS稀释到合适的浓度；按每蛹20微升量，注射雌蛹腹部,使抑制剂终浓度为0.5～2μmoL/L，常规保护至羽化；

3)未受精卵的收集和清洗：摘取羽化后在室温下保持8小时处女蛾的腹部，经室温自来水冲洗后，在14目塑料网纱上搓揉，剥离出未受精蚕卵并去除组织杂质，再用室温自来水冲洗干净、室温晾干后，备用；

4)温汤诱导处理：将晾干后未受精卵装入40目尼龙网纱小袋中封口后，浸入46℃水浴中，热激诱导15～18分钟后，转入室温自来水中漂洗3分钟，室温晾干；

5)诱导后未受精卵的保护：将晾干后的未受精卵放置在16℃、湿度85％的培养箱中96小时，取出后在室温下放置30分钟，二化性品种以46℃、比重1.075的盐酸水溶液浸没5分钟，室温自来水冲洗2分钟，晾干后，再在25℃、80％湿度条件下催青至孵化；多化性品种直接催青至孵化。