[发明专利]一种基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒，该试剂盒的内容物组成如下：96孔ELISA酶标板、包被抗体4F10、人PGRN标准蛋白、生物素标记的检测抗体5F7‑biotin、Avidin与HRP的交联蛋白、包被缓冲液、封闭液、样品及检测抗体稀释液、ELISA酶标板洗涤液、底物液和终止液。可快速检测癌症及糖尿病病人血清中的PGRN蛋白含量，由多功能酶标仪进行定量分析，结果准确可靠，为临床检验和基础研究提供了一种新的辅助工具。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学检测研究领域的试剂盒，具体涉及一种基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒。

背景技术

双夹心ELISA检测方法操作简单、高效、可靠、适用于大批样品快速筛选，基于单克隆抗体的双夹心ELISA较多克隆抗体更稳定，特异性更强。

颗粒蛋白前体(Progranulin，PGRN)是一种含有593个氨基酸的分泌性糖蛋白，含有7.5个半胱氨酸结构域，命名为GrnP，GrnG，GrnF，GrnB，GrnA，GrnC,GrnD，GrnE。PGRN与胚胎发育，损伤修复，炎症，肿瘤的发生发展等生理病理过程息息相关。研究表明，人血清中PGRN的含量与一些疾病有关，如：糖尿病，肿瘤，神经退行性疾病等，PGRN作为一种分泌性糖蛋白，可以作为诊断这些相关疾病的标志物，对于这些疾病的诊断、治疗、监控及预后提供了重要的依据，所以快速、准确、高灵敏度地检测相关病人血清中的PGRN蛋白的含量尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种简便、灵敏度高、特异性强、适应大规模检测的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒。

为了实现上述任务，本发明通过以下技术方案得以实现：

一种基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒，其特征在于，该试剂盒的内容物组成如下：96孔ELISA酶标板、包被抗体4F10、人PGRN标准蛋白、生物素标记的检测抗体5B7-biotin、Avidin与HRP的交联蛋白、包被缓冲液、封闭液、样品及检测抗体稀释液、ELISA酶标板洗涤液、底物液和终止液。

根据本发明，所述包被抗体4F10是针对人PGRN中GrnA结构域的小鼠抗人单克隆抗体，工作浓度为10μg/mL。

进一步地，所述生物素标记的检测抗体5B77-biotin是针对人PGRN中GrnB结构域的小鼠抗人单克隆抗体，工作稀释比例为1：4000。

所述的包被缓冲液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6；

所述封闭液为含体积分数为10％小牛血清的磷酸盐缓冲液，pH为7.4；

所述样品及检测抗体稀释液为含体积分数为1％小牛血清的磷酸盐缓冲液，pH为7.4；

所述ELISA酶标板洗涤液为含体积分数为0.1％Tween-20的磷酸盐缓冲液，pH为7.4；

所述底物液为TMB，即四甲基联苯胺(3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine)底物缓冲液；

所述终止液为摩尔浓度为2M的浓硫酸溶液。

所述人PGRN标准蛋白通过真核蛋白纯化的方法获得；所述Avidin与HRP的交联蛋白是采用过碘酸钠法将纯化的Avidin与HRP蛋白交联。

所述的过碘酸钠法是将HRP与过碘酸钠(NaIO4)反应，获得活化的HRP；

所述的Avidin与活化的HRP反应，获得Avidin与HRP的交联蛋白。

根据申请人的试验表明，本发明的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒，可以用于乳腺癌、肺癌及Ⅱ型糖尿病病人的血清学的检测应用。