[发明专利]用于检测人血清样品中25羟基维生素D含量的释放剂及其检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测人血清样品中25羟基维生素D含量的释放剂，其组分中含有质量体积比0.05%~0.3%的十二烷基磺酸钠，1%~20%的二甲基亚砜和1%~10%的乙醇；配制时，首先称取十二烷基磺酸钠，将其溶解于少量的0.05M Tris‑NaCl缓冲液中后，加入二甲基亚砜和乙醇，并用0.05M Tris‑NaCl缓冲液定容，用浓盐酸调整pH值至7.0，得到释放剂成品。本发明的优点在于配制方法简单，所用组分对环境和生物体危害较小；检测时可使25羟基维生素D及其代谢物从结合蛋白上有效释放，使之被充分检测；无需对样本进行预处理，可与其他试剂同时加入，便于进行自动化操作。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术，尤其是涉及一种用于定量检测人血清样品中25羟基维生素D含量的释放剂，本发明还涉及使用该释放剂检测人血清样品中25羟基维生素D含量的方法。

背景技术

维生素D是一种类固醇激素，有两个主要类型：维生素D2（麦角钙化醇）和维生素D3（胆钙化甾醇），它们的结构很相似，只是侧链有差别。人体内的维生素D主要来源于皮肤中的7-脱氢胆固醇经紫外线照射转变成维生素D3，此外还包括从鱼、肉等食物中摄取的维生素D3和膳食补充剂中的维生素D2。无论哪种形式的维生素D，在血液中均与结合蛋白结合后运输至肝脏，在肝脏中被转换成为25(OH)VD，而后在肾脏中被转化为1,25-(OH)₂VD，这是维生素D发挥作用的生物活性成分，但人体内循环中的1,25-(OH)₂VD含量极少，半衰期仅有4h。而循环中的25(OH)VD含量是1,25-(OH)₂VD的1000倍，是维生素D在循环中的主要存在形式，半衰期3周，能够反映人体维生素D的真实水平，是反映个体维生素D状态的最佳指标。

在人血清中，几乎所有的25羟基维生素D都与结合蛋白结合，其中约88%与维生素D结合蛋白结合，约12%与白蛋白结合。结合蛋白在血清中的浓度约为250-400mg/L，且结合蛋白与25羟基维生素D的结合常数高达Ka=6×10 ⁵ M^-1，

只有将25羟基维生素D从结合蛋白上有效释放，才能准确测量血清中25羟基维生素D 的浓度。

目前将25羟基维生素D从结合蛋白上释放的方法有多种，PCT国际申请WO99/67211中使用的方法是通过乙醇沉淀蛋白，除去沉淀，回收含有待测25羟基维生素D的上清液进行检测，但是该方法不能通过自动化完成，检测结果存在较大的误差。美国专利US7482162提出了使用ANS从结合蛋白上竞争取代25羟基维生素D的方法，申请人通过验证发现该方法并不能将待测物质从其结合蛋白上解离。PCT国际申请WO2008/092917A1发表了使用蛋白水解消化的方法将25羟基维生素D从其结合蛋白上解离，但是该方法操作繁琐且耗时较长。其他诸如WO2003/023391公开了利用通过羟基化芳香族羧酸的取代来直接测量25羟基维生素D的方法；EP2007/140962中提出了使用pH3.8 至4.8 的一种或者多种两性试剂和5-30%DMSO、液体有机酰胺和可选地0.5-5% 的短链醇从维生素D结合蛋白上释放25羟基维生素D,该专利中使用的两性化合物是有毒性的危险物质。WO2012/091569提出了使用全氟烷基酸或其盐从维生素D结合蛋白中释放25羟基维生素D，其中全氟烷基酸类物质可能会对环境和生物体造成危害。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术所存在的不足，提供一种用于检测人血清样品中25羟基维生素D含量的释放剂，该释放剂易于实施，且组分中不含对环境和生物体危害成分，保证了对血清中25羟基维生素D 浓度的精确检测。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的用于检测人血清样品中25羟基维生素D含量的释放剂，其组分中含有质量体积比0.05%~0.3%的十二烷基磺酸钠，1%~20%的二甲基亚砜和1%~10%的乙醇；