[发明专利]一种用于检测LAG-3蛋白的电化学免疫传感器

说明书

本发明提供一种用于检测LAG‑3蛋白的电化学免疫传感器，包括工作电极、参比电极和辅助电极，工作电极由基底电极修饰rGO‑SnO₂与Ni‑Co层状双氢氧化物的复合物获得。本发明具有结构优势和优异的导电性，表现出优异的电催化活性，使用生物素‑链霉亲和素蛋白系统来提高所提出的免疫传感器的灵敏度。此外，SiO₂的利用增加了电化学信号的区别。由于这些优点，所提出的免疫传感器具有很宽的线性范围，检测下限为1.1pg·mL^‑1，满足了对低量LAG‑3在人血清中的检测，为临床早期肿瘤诊断应用中测定LAG‑3提供了一种新的方法。因此，本发明有可能用于确定用于临床诊断的生物标志物。

技术领域

本发明涉及电化学领域，特别是涉及一种用于检测LAG-3蛋白的电化学免疫传感器。

背景技术

淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)是在活化的CD4⁺和CD8⁺T细胞上表达的I型跨膜蛋白。作为负检查点抑制剂，LAG-3负调节T细胞功能，从而促进肿瘤逃逸。LAG-3浓度的变化可能被认为是HIV感染、冠状动脉疾病、慢性淋巴细胞白血病、黑色素瘤、肾细胞癌、胰腺癌、前列腺癌等疾病的标志。作为潜在的肿瘤生物标志物，在人类癌症患者中，已发现LAG-3优先在一些肿瘤亚型中与外周相比表达。因此，开发具有高灵敏度和特异性的LAG-3检测方法对临床实时监测和早期诊断至关重要，以减少对人体健康的不利影响。根据文献报道，免疫印迹、化学发光、酶联免疫吸附试验和胸苷掺入试验已被用于LAG-3检测，这些方法可以检测到LAG-3，具有很高的准确性和稳定性。然而，这些方法的样品前处理过程复杂，且需要昂贵的设备，较长的检测时间和复杂的样品制备，上述缺点限制了这些方法在临床检测的床旁检测的使用。近年来，电化学免疫传感器已被用于便携式设备和即时护理应用中。因此，电化学免疫传感器已被开发出来并被广泛用于检测肿瘤标志物、食品添加剂和环境污染物。

现有的电化学免疫传感器对LAG-3的检测灵敏度不够，亟待改进。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种用于检测LAG-3蛋白的电化学免疫传感器，用于解决现有技术中对LAG-3的检测灵敏度低、准确性和稳定性差等问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种用于检测LAG-3蛋白的复合物，由rGO-SnO₂与Ni-Co层状双氢氧化物中空纳米体通过Au-NH₂和Pt-NH₂键结合获得。

本发明第二方面提供上述复合物的制备方法，包括如下步骤：

1)将Co(NO₃)₂溶于CTAB水溶液中，得到混合液，再将2-甲基咪唑溶液加入该混合液中，固液分离，得到钴基沸石咪唑骨架纳米立方体；

2)将步骤1)制得的钴基沸石咪唑骨架纳米立方体溶于乙醇中，再加入含有Ni(NO₃)₂的乙醇溶液，反应结束后，固液分离，干燥，得到Ni-Co层状双氢氧化物中空纳米体；

3)将步骤2)制得的Ni-Co层状双氢氧化物中空纳米体分散于水中，加入NaBH₄乙醇溶液，反应结束后，滴加H₂PtCl₆乙醇溶液和HAuCl₄乙醇溶液，反应结束后，滴加NaBH₄乙醇溶液，反应结合后，固液分离，将固体干燥，得到产物；

4)rGO-SnO₂复合物分散于乙醇中，加入APTES，反应结束后，固液分离，干燥，将所得产物rGO-SnO₂-APTES分散于水中，制成水溶液，将该水溶液与步骤3)所得产物的水溶液混合，反应结束后，固液分离，得到所述用于检测LAG-3蛋白的复合物。