[发明专利]HPLC测定罗汉果茶中山奈素含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及测定罗汉果茶中山奈素含量的方法，尤其涉及一种HPLC测定罗汉果茶中山奈素含量的方法。

背景技术

罗汉果茶是由罗汉果提取、加工制成的茶剂。经大量的临床试验证明，罗汉果茶对于治疗急性支气管炎痰热壅肺所致咳嗽、痰多、口干等症有良好效果，根据文献报道，罗汉果中除含葫芦烷类化合物外，还得到了2种黄酮苷；由于黄酮类化合物具有消炎、强心、降压、扩张冠状动脉、降低胆固醇、利尿、止咳祛痰、保肝等作用，故通过测定罗汉果茶中黄酮类化合物的含量，达到控制产品质量的目的。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种HPLC测定罗汉果茶中山奈素含量的方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种HPLC测定罗汉果茶中山奈素含量的方法，包括以下步骤：

(1)制备对照品溶液：取山奈素对照品与甲醇制成对照品溶液；

(2)制备待测样品溶液：精密取罗汉果茶样品加甲醇稀释，制得待测样品溶液；

(3)取对照品溶液注入高效液相色谱仪测定，建立山奈素标准曲线；

(4)取待测样品溶液注入高效液相色谱仪测定，获得山奈素的峰面积，从而根据标准曲线获得山奈素含量；

所述步骤(3)和(4)的色谱条件：5μ，4.6mm×250mm，Diamonsil C18柱，流动相：甲醇-0.4％磷酸氢钠＝58:42；流速：1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长：364nm。

所述步骤(1)中，取经五氧化二磷减压干燥过夜的山奈素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得对照品溶液。

所述步骤(2)中，取罗汉果茶研细，精密称定30g，精密加入甲醇100ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，减压蒸干，残渣加水30ml分次转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇40、30、20、20ml分别振摇提取，合并正丁醇提取液，减压蒸干，残渣加甲醇14ml使溶解，加18％盐酸溶液6ml，置水浴加热回流30分钟，放冷，定量转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得待测样品溶液。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

与现有技术相比，本发明提供的方法直接溶解样品，可避免这种误差的发生，操作简单，高效省时，鉴定结果客观准确。

具体实施方式

实施例1

(1)制备对照品溶液：取经五氧化二磷减压干燥过夜的山奈素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得对照品溶液。

(2)制备待测样品溶液：取罗汉果茶研细，精密称定30g，精密加入甲醇100ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，减压蒸干，残渣加水30ml分次转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇40、30、20、20ml分别振摇提取，合并正丁醇提取液，减压蒸干，残渣加甲醇14ml使溶解，加18％盐酸溶液6ml，置水浴加热回流30分钟，放冷，定量转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得待测样品溶液。

(3)分别精密吸取对照品溶液定量稀释成浓度为0.003057mg·ml^-1、0.006114mg·ml^-1、0.01019mg·ml^-1、0.02038mg·ml^-1、0.03057mg·ml^-1的溶液，分别注入Agilent1100型高效液相色谱仪，进样10μl，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标(X)，山奈素峰面积为纵坐标(Y)，计算得出回归方程：Y＝5.0732×10³X-3.5162(r＝0.9998，n＝5)

色谱条件：5μ，4.6mm×250mm，Diamonsil C18柱，流动相：甲醇-0.4％磷酸氢钠＝58:42；流速：1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长：364nm。

(4)取待测样品溶液注入Agilent1100型高效液相色谱仪进行测定，获得山奈素峰面积，根据回归方程计算得到山奈素的含量。取不同批号的罗汉果茶3批分别进行测定，山奈素含量分别为：0.2030mg/块、0.2027mg/块，0.2035mg/块。

本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不是限制，因此凡是依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何细微修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。