[发明专利]HPLC检测枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC检测枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：取齐墩果酸和熊果酸的对照品分别用甲醇制成对照品溶液；(2)制备待测样品溶液：取枇杷叶药材经快速溶剂萃取，获得的萃取液用甲醇稀释，得到待测样品溶液；(3)制定标准曲线：取不同浓度的齐墩果酸和熊果酸的对照品溶液混合后上高效液相色谱仪进行定量测定，分别获得齐墩果酸和熊果酸的标准曲线；(4)测定待测样品溶液：取待测样品溶液上高效液相色谱仪进行定量测定，获得齐墩果酸和熊果酸的峰面积，然后根据齐墩果酸和熊果酸的标准曲线获得待测样品中齐墩果酸和熊果酸的含量。本发明提取效率高，检测简便快速。

技术领域

本发明涉及检测枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸方法，尤其涉及一种HPLC检测枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的方法。

背景技术

齐墩果酸(oleanolic acid)和熊果酸(ursolic acid)都是五环三萜类化合物，是多种中药材均含有的活性成分，具有保肝、消炎、抗肿瘤、调血脂、免疫双向调解等药理作用。其检测的方法有分光光度法、薄层扫描和高效液相色谱法，齐墩果酸和熊果酸互为同分异构体，仅29、30位的甲基位置不同，分离存在一定困难，要将两者分开，色谱条件的选择非常重要，近年来采用HPLC测定的方法大多流动相组成复杂，出峰时间长，峰形和分离度不太理想。

快速溶剂萃取(ASE)是指在密闭容器内于高温(50～200℃)和高压(3448～20685kPa)条件下，在短时间内，用有机溶剂提取固体或半固体样品的一种新型样品前处理方法。与超声、微波、回流、超临界萃取等成熟方法相比，ASE有萃取溶剂用量少、提取时间短、萃取效率高、操作简单方便、安全和自动化程度高等优点。国外已有学者将这项技术应用于植物药定量和定性分析中样品的前处理，但在中药材有效成分的定量和定性分析中作为样品的前处理方法应用较少。

枇杷叶(Eriobotrya japonica Thunb.)为蔷薇科植物枇杷的叶子。枇杷叶含挥发油，主要成分为橙花叔醇(Nerolidol)和金合欢醇(Farnesol).尚有α和β蒎烯、莰烯、月桂烯、对聚伞花素、芳樟醇、α-衣兰烯、α和β金合欢烯、樟脑、橙花醇、牻牛儿醇、α-毕澄茄醇、榄香醇、顺-β,γ-己烯醇和芳樟醇氧化物。亦含苦杏仁甙(Amygdalin)、熊果酸、齐墩果酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、鞣质、维生素B和维生素C等。《中国药典》2015年版记载了枇杷叶的成分测定方法，但是其提取时间长，为30min，药典方法使用C18色谱柱，分析时间为35～65min，使用缓冲盐或三乙胺，试剂配制过程繁琐。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种HPLC检测枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种HPLC检测枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步骤：

(1)制备对照品溶液：取齐墩果酸和熊果酸的对照品分别用甲醇制成对照品溶液；

(2)制备待测样品溶液：取枇杷叶药材经快速溶剂萃取，获得的萃取液用甲醇稀释，得到待测样品溶液；

(3)制定标准曲线：取不同浓度的齐墩果酸和熊果酸的对照品溶液混合后上高效液相色谱仪进行定量测定，分别获得齐墩果酸和熊果酸的标准曲线；

(4)测定待测样品溶液：取待测样品溶液上高效液相色谱仪进行定量测定，获得齐墩果酸和熊果酸的峰面积，然后根据齐墩果酸和熊果酸的标准曲线获得待测样品中齐墩果酸和熊果酸的含量。

所述步骤(3)和(4)中的色谱条件：150mm×2.1mm，3μm Thermo Acclaim C30色谱柱，进样量1μ量，以体积比为90∶10的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相，检测波长为205nm，柱温18℃，体积流量0.2mL/min。