[发明专利]一种高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法

说明书

本发明公开了一种高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，所述方法包括：采用Triton‑X114处理含内毒素的白蛋白溶液；通过阴离子交换色谱法回收白蛋白。含有内毒素的白蛋白溶液先后经Triton‑X114和阴离子交换色谱法处理，与单独采用Triton‑X114处理相比，显著提高内毒素清除效率，有效提高白蛋白回收率，同时降低添加物Triton‑X114的残留量，本方法操作简便，适用于大样品量处理及可放大为工业化生产工艺。采用本发明公开的方法，内毒素的清除效率>99.99％，蛋白回收率>88％，Triton‑X114的残留率<0.02％。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法。

背景技术

血液制品无论是在人医或兽医临床，都属于紧俏的治疗性生物制品，有“保命药”之美称。最初的血液制品主要包括全血和成分血，即对血液进行简单处理而成，但血源性疾病的传播和扩散是其致命潜在危险。其后，随着分离纯化等技术的进步，从复杂的血液或血清(血浆)中分离纯化各种有效成分成为当前血液制品的主要方式。如通过对人血液的分离纯化，目前已获得了包括人血白蛋白、球蛋白、凝血酶源、凝血因子等20多种治疗产品。同时，由于在血液分离提纯过程中加入了病原灭活和清除等工艺，产品的安全性明显提高。此外，利用基因工程技术生产血液制品(如重组人血白蛋白、重组各种凝血因子等)也受到生物制药产业的高度重视，其中最具代表性的是利用酵母菌表达人血白蛋白。相对于人血的精细化分离纯化和利用，动物血液制品以蛋白丰度最高且价值较大的白蛋白和球蛋白为主。

但是，白蛋白等血液制品在临床上主要以静脉输注方式给药。如果其中存在较高浓度的内毒素，将引起机体发热等不良反应，严重者可能出现虚汗、恶心、呕吐等表现。因此，我国药典规定，人静脉注射剂的内毒素含量应低于0.5EU/mL，否则产品质量不合格。

血液及其制品营养丰富，非常适宜于细菌生长。如供血者本身携带有细菌(特别是革蓝氏阴性菌)，或者在血液收集、保存和运输以及分离纯化等过程污染了外源性细菌，都可能导致细菌在其中大量增殖，而细菌细胞壁上的脂多糖和脂蛋白(内毒素主要成分和来源)将混入制品，使得制品中的内毒素含量增加，输注后将导致机体出现不良反应。内毒素清除方法及工艺研究因而受到重视。

对于白蛋白、球蛋白等血液制品中的内毒素，人们探索了多种清除方法，如用Triton-X114在低温处理然后再在较高温度(30～37℃)下进行两相分离(Triton-X114在较高温度下将从水相中分离出来)，但Triton-X114残留量较高，且内毒素清除效率通常在95％左右；增加抽提次数，虽然能提高内毒素清除效率(达到99％)，但蛋白回收率将会明显降低。也有研究认为，铜离子(cu2+)等金属螯合柱能特异性结合内毒素而不结合白蛋白，但效率较低，不适合大样品量处理。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，用以解决现有技术存在的问题。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：一种高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，所述方法包括：采用Triton-X114处理含内毒素的原始白蛋白溶液；通过阴离子交换色谱法回收白蛋白。

进一步地，在含内毒素的原始白蛋白溶液中加入体积百分比为0.2～0.6％的Triton-X114，并在4～8℃的温度下搅拌12～16h。

进一步地，在含内毒素的原始白蛋白溶液中加入体积百分比为0.3％的Triton-X114。

进一步地，在4℃的温度下搅拌16h。

进一步地，通过阴离子交换色谱法回收白蛋白进一步包括以下步骤：