[发明专利]源于草酸青霉的4-4’异构化黑麦酮酸D在淋巴瘤方面的应用

说明书

本发明涉及一种源于草酸青霉的4‑4’异构化黑麦酮酸D在淋巴瘤方面的应用。该化合物结构特征是：与已知物黑麦酮酸D的2‑2’连接不同，异构化为罕见的4‑4’连接。经实验证实，所述多酚类化合物对淋巴瘤细胞具有较好的抑制活性。可作为制备淋巴瘤细胞增殖抑制药物或抗淋巴瘤药物用于抗肿瘤的研究。

技术领域

本发明涉及一种源于草酸青霉的4-4’异构化黑麦酮酸D在淋巴瘤方面的应用。

背景技术

黑麦酮酸是一类由微生物次级代谢产生的多酚类有机化合物，自1952年黑麦酮酸A首次从真菌中发现至今，已经过去了半个多世纪。该类化合物发现至今，一共报道了9个，分别是黑麦酮酸A-I。除了黑麦酮酸I，所有天然来源的黑麦酮酸均为2-2’连接。黑麦酮酸I则是4-2’连接，4-4’连接非常罕见。该类化合物对肿瘤细胞抑制明显，是开发抗肿瘤药物或者肿瘤细胞增殖抑制剂的理想原料。

本发明人研究得知，草酸青霉 (Penicillium oxalicum) IBPT-6， (已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址: 武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC NO：M 2013714) 的发酵产物的粗提取物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示黑麦酮酸类化合物具有抗人淋巴瘤活性，目前尚未见该化合物对人淋巴瘤细胞的增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种源于草酸青霉的4-4’异构化黑麦酮酸D在淋巴瘤方面的应用。该化合物具有抑制淋巴瘤细胞增殖作用，具有抗人淋巴瘤活性。其结构式为：

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该化合物的制备方法，是通过发酵培养草酸青霉 (Penicillium oxalicum)IBPT-6，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。具体步骤如下：

1发酵生产

培养微生物的常规方法，取草酸青霉 (Penicillium oxalicum) IBPT-6接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养2至3天，然后接种到培养液中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液；所述培养液组成：每升水含甘露醇20.0 g、酵母膏3.0 g、麦芽糖20.0g、味精10.0 g、葡萄糖10.0 g、KH₂PO₄ 0.5 g、MgSO₄·7H₂O 0.3 g、NaCl 15.0 g；

2 浸膏的获得

用纱布将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用丙酮溶液（含20%~30%水）连续超声破壁3次，过滤去除残渣，得到菌丝体的含丙酮和水的粗提物。减压浓缩去除丙酮，得到粗体物的水溶液，再以体积比1:2加入乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯粗提液，减压浓缩至近干得菌丝体浸膏36.5 g。

3 化合物的分离精制

菌丝体浸膏通过100-200目硅胶拌样，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱液，进行减压硅胶色谱柱层析。经过简单的薄层色谱分析，合并，分离成组分A-E。组分C (12.7 g) (二氯甲烷洗脱物)以二氯甲烷：甲醇=1:2为梯度洗脱剂，进行凝胶柱层析（Sephadex LH-20），经过薄层色谱分析后合并得到四个亚组分C-1~C-4。亚组分C-3 (4.9 g) 通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250 mm，5 μm)：分离流速为5 mL/min，流动相为55%乙腈含0.1%TFA，得到所示化合物 (1.1 g，t_R 18.5 min)。