[发明专利]源于草酸青霉的4-4’异构化黑麦酮酸D在肝癌方面的应用

说明书

本发明公开了一种源于草酸青霉的4‑4’异构化黑麦酮酸D在肝癌方面的应用。与已知物黑麦酮酸D的2‑2’连接不同，该化合物异构化为罕见的4‑4’连接，且经实验证实，该多酚类化合物对肝癌细胞具有较好的抑制活性，可用于制备肝癌细胞增殖抑制药物或抗肝癌药物，用于抗肿瘤的研究。

技术领域

本发明涉及一种源于草酸青霉的4-4’异构化黑麦酮酸D在肝癌方面的应用。

背景技术

黑麦酮酸是一类由微生物次级代谢产生的多酚类有机化合物，自1952年黑麦酮酸A首次从真菌中发现至今，已经过去了半个多世纪。该类化合物发现至今，一共报道了9个，分别是黑麦酮酸A-I。除了黑麦酮酸I是4-2’连接，其余所有天然来源的黑麦酮酸均为2-2’连接，而4-4’连接非常罕见。本发明人在原有研究的基础上，通过对草酸青霉(Penicillium oxalicum) IBPT-6 （已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC NO：M 2013714）的发酵产物粗提取物的活性成分进行研究，获得一种异构化为罕见的4-4’连接的黑麦酮酸类化合物，其具有抗人肝癌活性，而目前尚未见该化合物对人肝癌细胞的增殖抑制活性的报道，市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种源于草酸青霉的4-4’异构化黑麦酮酸D在肝癌方面的应用。该化合物具有抑制肝癌细胞增殖的作用及具有抗人肝癌细胞活性，可用于制备抗肝癌药物。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种源于草酸青霉的4-4’异构化黑麦酮酸D，其结构式为：

。

该化合物的制备方法，是通过发酵培养草酸青霉 (Penicillium oxalicum)IBPT-6，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化获得。其具体步骤如下：

1. 发酵生产

培养微生物的常规方法，取草酸青霉 (Penicillium oxalicum) IBPT-6接种到PDA固体斜面培养基上，28℃培养箱中培养2-3天，然后接种到培养液中，28℃静止培养30天后获得菌丝体和发酵液；所述培养液组成为：每升水含甘露醇20.0 g、酵母膏3.0 g、麦芽糖20.0g、味精10.0 g、葡萄糖10.0 g、KH₂PO₄ 0.5 g、MgSO₄·7H₂O 0.3 g、NaCl 15.0 g；

2. 浸膏的获得

用纱布将菌丝体和发酵液分离；菌丝体用丙酮溶液（含20%~30%水）连续超声破壁3次，过滤去除残渣，得到菌丝体的含丙酮和水的粗提物；减压浓缩去除丙酮，得到粗体物的水溶液，再以体积比1:2加入乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯粗提液，减压浓缩至近干，得菌丝体浸膏。

3. 化合物的分离精制

菌丝体浸膏通过100-200目硅胶拌样，以石油醚-二氯甲烷-甲醇为梯度洗脱液进行减压硅胶色谱柱层析；经过简单的薄层色谱分析，合并，分离成组分A-E。组分C（二氯甲烷洗脱物）再以二氯甲烷:甲醇=1:2为洗脱剂进行凝胶柱层析（Sephadex LH-20），经过薄层色谱分析、合并得到四个亚组分C-1~C-4；亚组分C-3通过半制备液相色谱（1010型ODS-A，10×250mm，5 μm；分离流速为5 mL/min，流动相为含0.1% TFA的55%乙腈），得到所示化合物（t_R18.5 min）。