[发明专利]一种脲基甲酸水解酶及其制备方法

权利要求书

1.一种脲基甲酸水解酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种脲基甲酸水解酶基因，其特征在于：编码权利要求1所述的脲基甲酸水解酶；其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.包含权利要求2所述脲基甲酸水解酶基因的重组载体，其特征在于：所述载体的构建方法为：将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的脲基甲酸水解酶的编码基因插入到质粒pET21a上的EcoRI和NdeI限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于启动子下游并受其调控，得到重组大肠杆菌BL21表达质粒pET21a-APH。

4.PCR扩增权利要求2所述脲基甲酸水解酶基因的引物序列，其特征在于：所述引物序列的正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4。

5.一种制备权利要求1所述的脲基甲酸水解酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的脲基甲酸水解酶的编码基因插入到质粒pET21a上的EcoRI和NdeI限制性酶切位点之间，得到重组大肠杆菌BL21表达质粒pET21a-APH；

2)将上述重组载体转化大肠杆菌BL21感受态，得到重组菌株Ecoli BL21-pET21a-APH；

3)将Ecoli BL21-pET21a-APH扩大培养，诱导表达脲基甲酸水解酶，收集菌体；

4)菌体破碎后，通过Ni-NTA亲和层析色谱柱纯化后得到纯化的脲基甲酸水解酶。

6.一种制备和检测权利要求1所述的脲基甲酸水解酶鼠来源的多克隆抗体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)纯化后的脲基甲酸水解酶注射小鼠，采集血清；

2)用步骤1)中得到的血清通过ELISA进行效价检测；

3)步骤2)中的测得的效价符合条件，即进行抗体纯化；

4)将步骤3)中纯化得到的抗体与脲基甲酸水解酶的原始菌株的破碎液进行WesternBlotting检测。