[发明专利]人溶菌酶基因的合成及其表达产物的构建方法在审
| 申请号： | 201711374919.7 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN108165567A | 公开（公告）日： | 2018-06-15 |
| 发明（设计）人： | 刘燊;李浩杰;张辉华;杨雪珍;林树茂 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/81;C12N9/36 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谢泳祥 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人溶菌酶基因 氨基酸序列 毕赤酵母 表达产物 密码子 构建 合成 稀有密码子 基因序列 人溶菌酶 真核表达 重组蛋白 优化 | ||
【权利要求书】：
1.一种人溶菌酶基因针对毕赤酵母优化表达的序列，如SEQ ID No.1所示。
2.构建表达人溶菌酶重组菌的方法，包括以下步骤：
1)按权利要求1所述序列合成人溶菌酶基因片段，其两端分别加入酶切位点Xho I和Not I；
2)步骤1的基因片段通过双酶切插入质粒pPICZαA中，构建表达载体pPICZαA-hLZ；
3)将表达载体pPICZαA-hLZ通过电转化至毕赤酵母X-33。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤2和3之间还包括步骤：2’)利用大肠杆菌Top10进行表达载体pPICZαA-hLZ的单克隆扩增。
4.一种制备人溶菌酶的方法，其特征在于，使用根据权利要求2或3所述的构建方法获得的表达人溶菌酶重组菌，以甲醇诱导表达，通过亲和层析树脂纯化获得人溶菌酶；所述表达步骤和纯化步骤包括：扩大培养含人溶菌酶重组菌4L，收集培养基进行下游纯化，取诱导96h后的培养液离心，上清液用0.22um膜过滤，在4℃环境下透析16h，缓冲液50mM Tris，150mM NaCl，pH 8.0，透析结束后用Ni-IDA树脂纯化。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于佛山科学技术学院，未经佛山科学技术学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711374919.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
