[发明专利]用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用

权利要求书

1.一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于高通量荧光定量PCR检测大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性，包括以16S rDNA为内参基因的emrB、emrA、emrE、emrK、emrR、emrY、mdtK、mdtA、mdtE、mdtG、mdtH、mdtD、mdtM、mdtN、mdtO、mdtP基因的引物，所述引物的序列如下所示：

16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；

16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；

emrB的上游引物：CTTTTCTCTAACCGTACATTATCTACGATAAA；

emrB的下游引物：AGAACGTAGCGACTGATAAAATGCT；

emrA的上游引物：CTGCTCCTCCTTCTCACCTTG；

emrA的下游引物：TTATCGGCCCAGACTTTCGT；

emrE的上游引物：ATCTTGGTGGTGCAATACTTG；

emrE的下游引物：GGACAATACCGACTCCTGAC；

emrK的上游引物：ATGCCACTATCGCACTCAA；

emrK的下游引物：TGGTATGCTCCAGCGTTTC；

emrR的上游引物：TTTACCGCCGCAGCATAAC；

emrR的下游引物：ACACCGCCCTGTTCCATCT；

emrY的上游引物：TTAGTGCTCGGTGTTGGTG；

emrY的下游引物：GAGTAACTGCGGCATAAGG；

mdtK的上游引物：ACACCAGATTGCCCTGAACTT；

mdtK的下游引物：TTGCCATACAGACACCCACC；

mdtA的上游引物：CCTAACGGGCGTGACTTCA；

mdtA的下游引物：TTCACCTGTTTCAAGGGTCAAA；

mdtE的上游引物：CGTCGGCGCACTCGTT；

mdtE的下游引物：TCCAGACGTTGTACGGTAACCA；

mdtG的上游引物：TGGCACAAAATATCTGGCAGTT；

mdtG的下游引物：TTGTGTGGCGATAAGAGCATTAG；

mdtH的上游引物：CTGCCGTTAAATGGATGTATGC；

mdtH的下游引物：ACTCCAGCGGGCGATAGG；

mdtD的上游引物：GTCTGAAACTGTTCCGCACTC；

mdtD的下游引物：ACCAAAGCGATTCACTACCTG；

mdtM的上游引物：GAGGCGTTCGGACAGACAA；

mdtM的下游引物：CCAACAGTAAGCCAACAAATGA；

mdtN的上游引物：CTCTGTTAGTGGTTGCGTTGG；

mdtN的下游引物：ACTGCCTGGTTGTCGGTGA；

mdtO的上游引物：CTGGGATGCCACCTGGAACT；

mdtO的下游引物：TGAGGAGAACGGCTGAGTGC；

mdtP的上游引物：CGAAACTGCGGGAAGAAA；

mdtP的下游引物：GCAAACAAACCTACTGTGGC。

2.一种非诊断目的的用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测方法，其特征在于：所述检测方法为高通量荧光定量PCR方法，所述检测方法至少包括以下步骤：

步骤1、从待测样品中提取DNA样品；

步骤2、采取权利要求1所述用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒对步骤1所提取的所述DNA样品使用高通量荧光定量PCR仪进行扩增反应；

步骤3、对所得结果进行数据分析。

3.如权利要求2所述的非诊断目的的用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测方法，其特征在于：所述高通量荧光定量PCR反应体系组成如下：Roche FastStart UniversalSYBR Green Master：5μL，ddH₂O：3μL，上游引物：0.75μL，下游引物：0.75μL，DNA样品：0.5μL。