[发明专利]一种热稳定性提高的纳豆激酶

权利要求书

1.一种稳定性提高的纳豆激酶突变体，其特征在于，所述突变体是(1)或(2)：

(1)将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的纳豆激酶的第218位的天冬酰胺突变为天冬氨酸；

(2)将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的纳豆激酶的第59位的谷氨酰胺突变为谷氨酸，同时将第218位的天冬酰胺进行突变为天冬氨酸。

2.表达权利要求1所述突变体的重组菌。

3.权利要求2所述重组菌的构建方法：将纳豆激酶突变体的基因连接在载体pET24a上，以大肠杆菌BL21为宿主，构建重组菌。

4.权利要求2所述重组菌表达纳豆激酶突变体的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：

(1)将重组菌接种于含卡那霉素的LB培养基，35-38℃、150-250r/min振荡过夜培养得到种子液；

(2)将种子液按质量分数为1-2％的接种量分别接种于含卡那霉素的表达培养基中，35-38℃、150-250r/min振荡培养至OD₆₀₀至0.6-0.8时，加入诱导剂IPTG，于15-18℃诱导18-24h纳豆激酶突变体的表达。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述诱导剂IPTG的浓度为0.05-0.2mM。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述表达培养基为TB培养基，所述TB培养基组分为：胰蛋白胨10-14g/L,酵母提取物20-26g/L，甘油3-8g/L，KH₂PO₄ 2.0-2.6g/L，K₂HPO₄·3H₂O 15.8-16.8g/L，CaCl₂ 0.15-0.25g/L，余量为水。

7.根据权利要求4-6任一所述的方法得到的纳豆激酶突变体。

8.权利要求7所述的纳豆激酶突变体在制备用于治疗心脑血管疾病药物中的应用。