[发明专利]一种石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种石斑鱼虹彩病毒的疫苗及其制备方法和应用。本发明的石斑鱼虹彩病毒的疫苗是SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码的蛋白。其是构建质粒pET32a‑VP72并转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达并破碎细胞后自上清中回收重组蛋白，即为石斑鱼虹彩病毒的疫苗。可以将重组蛋白rVP72与佐剂混合，所得疫苗混合液具有对新加坡石斑鱼虹彩病毒SGIV免疫保护的作用。本发明的石斑鱼虹彩病毒的疫苗其免疫效果稳定，保护率较高，具有高效保护性，可应用石斑鱼养殖过程中保护鱼苗及成鱼对抗石斑鱼虹彩病毒感染。

技术领域：

本发明属于分子生物学及免疫学领域，具体涉及到一种具有免疫保护性的新加坡石斑鱼虹彩病毒重组主要衣壳蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术：

石斑鱼是一种经济价值高的海洋鱼类。近年来沿海石斑鱼养殖规模扩大,但养殖环境日益恶化，各种病害特别是病毒性疾病频繁爆发，造成了重大的经济损失。虹彩病毒是石斑鱼的重要致病病原，它可以造成鱼类的死亡率从30％(成鱼中)到100％(幼苗阶段)。这种病毒在亚洲，特别是在25℃以上的高水温时，极易感染东亚和南亚等区域养殖的海水名贵鱼类，如石斑鱼、尖吻鲈、真鲷、牙鲆和大黄鱼等，致使鱼类大量死亡，造成严重经济损失。新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus，SGIV)是从养殖的石斑鱼中分离到的一株新的虹彩病毒，可导致石斑鱼幼苗死亡率达90％以上，给石斑鱼的养殖带来巨大的经济损失。因此，如何防治虹彩病毒病已成为当今石斑鱼养殖业急需解决的重要问题。

众所周知，疫苗作为化学药品和抗生素的替代品，是治疗疾病、特别是病毒病的最好选择。疫苗接种是防治病毒曼延的有效手段，包括灭活疫苗、DNA核酸疫苗、减毒疫苗和重组蛋白亚单位疫苗等。针对石斑鱼虹彩病毒SGIV，已经开发出全病毒灭活疫苗、DNA核酸疫苗。制备全病毒灭活疫苗需要进行细胞培养、病毒扩增，对细胞培养技术、设备使用及培养基、材料如血清等消耗要求较高；由于在制备全病毒灭活疫苗过程中可能存在病毒抗原丢失、抗原结构被破坏而造成免疫效果不稳定。DNA核酸疫苗虽然制备比较简单，且可产生持久免疫应答，但核酸DNA可能诱导产生自身免疫反应，持续表达外源抗原，可能导致机体对该抗原产生免疫耐受。重组蛋白亚单位疫苗绝对不含活毒成分，生产和使用过程无散毒可能，消除了污染的可能性，且免疫特异性强、重复性较好，可以通过发酵大规模生产，成本较低，是值得积极推广使用的安全疫苗。随着分子生物学技术的发展，对病毒基因结构与功能的研究深入，研制基因工程重组蛋白亚单位疫苗日趋成熟，是国内外发展的主要方向，已经广泛应用于多种人和动物疫苗的生产。目前没有针对新加坡石斑鱼虹彩病毒SGIV的重组亚单位疫苗报道。因此急需研发该病毒的重组亚单位疫苗产品，能够在低成本条件下大规模生产应用，快速、安全、有效预防控制该病毒的传播，从而保障石斑鱼养殖业的健康发展。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种疫苗稳定，保护率高的石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗。

本发明的石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗，其特征在于，所述的石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽。

进一步优选，所述的SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽与佐剂氢氧化铝混合形成石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗。

本发明的第二个目的是提供一种石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列转入到表达载体中，再将此表达载体转入宿主菌中，表达SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽，然后纯化收集此多肽，即得石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗。

优选，所述的表达载体为质粒pET-32a。

优选，所述的宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

进一步优先，所述的石斑鱼虹彩病毒的亚单位疫苗是通过以下方法制备的：