[发明专利]一种检测苦瓜枯萎病菌的PCR引物及通过PCR试剂盒检测的方法

权利要求书

1.一种检测苦瓜枯萎病菌的PCR引物，其特征在于，包括由上游引物和下游引物；所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ.ID.No.3，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ.ID.No.4所示，分别来自URP-32F(SEQ.ID.No.1)扩增的特异片段SEQ.ID.No.2和经优化的特异性扩增片段SEQ.ID.No.5。

2.一种如权利要求1所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，提取待检样品基因组DNA，使用PCR试剂盒进行PCR扩增；

步骤二，琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，判断样品是否含有苦瓜枯萎病菌；所述判断具体为：如果电泳结果在294bp位置出现单一的扩增条带，则说明样品中含有苦瓜枯萎病菌；如果没有出现相应的单一扩增条带，则样品中不含有苦瓜枯萎病菌。

3.根据权利要求2所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述PCR试剂盒含有引物FOMM-SPF和引物FOMM-SPR。

4.根据权利要求2所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述步骤一中所述的PCR试剂盒还含有PCR扩增缓冲液、阳性对照以及阴性对照。.

5.根据权利要求2所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述的阳性对照为含有苦瓜枯萎病菌特异性扩增片段的质粒DNA。

6.根据权利要求2所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述的阴性对照为无菌水。

7.根据权利要求2所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述PCR扩增所采用的检测体系为25μl，反应体系包括：2×Green Taq Master Mix 12.5μl，10μM的上下游引物各1μl，模板溶液1μl，最后用灭菌的去离子水补足至25μl。

8.根据权利要求2所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述步骤一中所述的PCR扩增所采用的扩增程序为：95℃预变性3min，之后开始扩增循环，每个循环的程序为：94℃变性15s，57℃退火30s，72℃延伸20s,循环共30个；循环结束后72℃延伸5min，降温至16℃结束。

9.根据权利要求3所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述引物FOMM-SPF和引物FOMM-SPR的摩尔比为1:1。

根据权利要求3所述的一种通过PCR试剂盒检测苦瓜枯萎病菌的方法，其特征在于，所述引物FOMM-SPF和引物FOMM-SPR的浓度均为10μM。