[发明专利]一种庆大霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种庆大霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标庆大霉素、用于检测庆大霉素抗体‑酶标庆大霉素复合物的指示试剂；上述酶标庆大霉素由庆大霉素和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的庆大霉素免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中庆大霉素含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体是一种庆大霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

庆大霉素（Gentamicin，GM）是一种氨基糖苷类抗生素，抗菌谱较广。其作用机制是作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成，并破坏细菌细胞膜的完整性。GM被广泛的应用于农、畜、禽、林和水产品的病虫害防治，由于使用者的滥用常常出现GM残留量大的问题。并且，庆大霉素对人类具有明显的毒害作用，对脑神经、听觉以及肾脏的损害严重。因此对动物源性食品中庆大霉素的残留量的限制与检测是非常必要的。

目前检测庆大霉素的常用方法有：高效液相色谱分析、酶联免疫吸附测定（ELISA）、和放射免疫测定（RIA）等。其中，高效液相色谱分析费时且不易自动化；ELISA 法定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，多用于定性检测；RIA 法所需时间较长，检测结果不稳定，重复性比ELISA 差，且存在放射性污染危险。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中庆大霉素检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中庆大霉素含量的庆大霉素均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种庆大霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标庆大霉素、用于检测庆大霉素抗体-酶标庆大霉素复合物的指示试剂；上述酶标庆大霉素由庆大霉素和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-庆大霉素偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的一种庆大霉素免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-庆大霉素偶联物的制备：制备葡萄糖脱氢酶（GDH）溶液，庆大霉素的活化，将GDH与庆大霉素偶联，纯化偶联的酶标抗原；

（2）庆大霉素均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由庆大霉素抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种庆大霉素免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）葡萄糖脱氢酶（GDH）溶液的制备：

a. 称取5-20 mg 规格为100-300 KU的GDH，室温溶解于6-10 ml PBS缓冲液中；

2）庆大霉素的活化

将如下化学品加入到烧杯中搅拌溶解：10-30 mg 庆大霉素、10-40 mg1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺、2-10 mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺，溶解于吗啉乙磺酸（MES）溶液中，于室温下搅拌溶解，反应15-60分钟；

3）GDH 与庆大霉素的偶联