[发明专利]一种马尾松菌根化苗木的培育方法

权利要求书

1.一种马尾松菌根化苗木的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、种子处理：挑选无病虫害、颗粒饱满均匀的马尾松种子，在质量浓度为25％-35％的双氧水中震动25-35min进行表面消毒后，用纯水冲洗干净，置于35-45℃温水中浸泡20-28小时，然后放置到装有珍珠岩的培养皿中进行催芽，待90％以上种子露白后播种；

步骤2、土壤处理：选择马尾松林下酸性冷砂黄壤作为供试土壤，土壤经2％的甲醛溶液消毒杀菌，膜覆盖7d，揭膜翻晒晾干，7d后备用；

步骤3、制备外生菌根真菌菌根菌剂；

步骤4、外生菌根真菌菌根菌剂接种：播种前将苗床细作整平后，铺15cm厚的经2％甲醛消毒且过筛的马尾松林下土；将接种体与经2％甲醛消毒的土混合成糊状，然后与经过催芽的马尾松种子拌匀，撒入苗床土壤中，每平方米撒播200粒马尾松种子；播种后再在其表面覆一层细土，以不见种子为宜；然后苗床洒透水；

步骤5、苗期管理：苗期管理参照GB6001-1985《育苗技术规程》执行；

步骤6、苗木出圃，培育出马尾松菌根化苗木。

2.根据权利要求1所述的马尾松菌根化苗木的培育方法，其特征在于，步骤2中供试土壤的基本理化性质如下：全量养分中N的含量为1.14g/kg，P的含量为0.16g/kg，K的含量为19.09g/kg；有效养分中N的含量为69.75mg/kg，P的含量为4.55mg/kg，K的含量为71.21mg/kg；交换性盐中Ca的含量为3.45cmol/kg，Mg的含量为0.34cmol/kg，K的含量为0.14cmol/kg。

3.根据权利要求1所述的马尾松菌根化苗木的培育方法，其特征在于，步骤3中的制备外生菌根真菌菌根菌剂具体如下：

步骤3.1、外生菌根真菌的分离和培养：选取新鲜、幼嫩、未开伞、无病虫害的完整子实体，用75％的酒精棉球表面消毒，待表面酒精挥发后，将子实体菌柄菌盖联结处掰开，用酒精和火焰消毒过的解剖刀在掰开的子实体内部取0.2cm-0.3cm大小的菌块，接在PDA平板上；将平板放入人工气候箱中25℃培养；3天后检查是否有污染，根据外生菌根真菌菌丝体是否直接从接种块上长出、生长速度以及同种真菌形成的菌落形态特征一致等特点，初步判定所分离菌种是否为外生菌根真菌纯培养物，对其生长特征进行详细观察；筛选无污染、菌落形态特征良好的各分离菌种进一步在PDA培养基上进行转接纯化，每7d一次，直至其生长稳定；4℃下保藏备用；

步骤3.2、将步骤3.1中分离纯化的外生菌根菌种转接到Pachlewski固体培养基上，在恒温条件下暗培养2周，作为母菌备用；

步骤3.3、接种体培养：在超净台下，将活化的菌种用打孔法转接到经高温灭菌后的Pachlewski液体培养基上，每瓶接入面积为5mm×5mm的母菌菌块4片，室温下静置培养2周，得菌丝体；培养完成后，将菌丝体在打浆机中低速打散1min，收集菌丝体悬浮液，作为接种体。

4.根据权利要求3所述的马尾松菌根化苗木的培育方法，其特征在于，所述PDA培养基通过以下方法制备得到：将200g马铃薯洗净去皮切碎后加水1000ml煮沸30min，用纱布过滤后再加葡萄糖20g、琼脂20g充分溶解，121℃高温灭菌30min后取出备用。

5.根据权利要求3所述的马尾松菌根化苗木的培育方法，其特征在于，所述Pachlewski固体培养基的配方为：每1L培养基中包括酒石酸铵0.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g、葡萄糖20g、维生素B₁ 0.001g、琼脂20g、微量元素混合液1mL；每升微量元素混合液含H₃BO₃8.45mg、MnSO₄ 5mg、FeSO₄ 6mg、CuSO₄ 0.625mg、ZnCl₂ 2.77mg和(NH4)₂MoO₄ 0.27mg。

6.根据权利要求3所述的马尾松菌根化苗木的培育方法，其特征在于，外生菌根真菌为Pt 715、Ld 2或Ld3菌中的一种。