[发明专利]一种建立NK和/或T细胞系的方法

权利要求书

1.一种建立NK和/或T细胞系的方法，其特征在于，采集患者的外周血单个核细胞，在存在细胞因子的条件下，用含有人血清的培养基进行培养；

其中，所述患者为慢性感染性EBV患者，或其他与EBV感染相关的淋巴细胞增殖症、淋巴瘤或白血病患者。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞因子选自IL-2、IL-4、IL-15、IL-21和IL-23中的一种或多种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述细胞因子的使用浓度为20U/mL～500U/mL。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)取患者0.5-2mL外周血，利用ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞；

(2)用培养基重悬细胞，添加细胞因子，使细胞浓度达到1～2×10⁶/mL，铺入24孔细胞培养板，1mL/孔；

(3)每隔2～3天进行半量换液，取出一半培养基弃掉，加入等量新鲜培养基和细胞因子；

(4)培养至6×10⁶，用培养基重悬细胞，平均分到多个孔中使细胞浓度达到1～2×10⁶，补足培养基至1mL，添加细胞因子；

(5)隔2～3天半量换液，取出一半培养基弃掉，添加含有细胞因子的培养基至1mL，继续扩大培养；

(6)培养至12个孔以上时，将24孔板里每3个孔转到T25细胞培养瓶中，等量加入含有细胞因子的培养基。

(7)隔2～3天半量换液，取出一半培养基弃掉，添加含有细胞因子的培养基继续扩大培养，细胞总量超过10⁷/瓶时，收获细胞，经离心后，10％DMSO+90％胎牛血清冻存，浓度保持在3×10⁶/支，可得NK和/或T细胞系；

其中：

所述培养基为添加有10～20％人血清和1％抗菌-抗真菌剂的RPMI1640培养基；

所述细胞因子选自IL-2、IL-4、IL-15、IL-21和IL-23中的一种或多种。

5.权利要求1～4任一项所述方法获得的NK和/或T细胞系。

6.一种预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求5所述的NK和/或T细胞系。

7.从权利要求6所述人NK和/或T细胞系中分选纯化的细胞组分。

8.含有权利要求7所述细胞组分的混合物。

9.权利要求5所述的细胞系在筛选诊断慢性活动性EBV感染、EBV相关淋巴细胞增殖症、淋巴瘤或白血病分子标记中的应用。

10.权利要求5所述的细胞系在筛选治疗慢性活动性EBV感染、EBV相关淋巴细胞增殖症、淋巴瘤或白血病病人分子靶标中的用途。

11.权利要求5所述的细胞系在筛选治疗慢性活动性EBV感染、EBV相关淋巴细胞增殖症、淋巴瘤或白血病病人药物中的用途。