[发明专利]一种改进的间充质干细胞保护液及其用途

说明书

本发明提供了一种改进的间充质干细胞保护液，通过渗透性保护剂平衡细胞内外未结冰的水溶液中电解质的浓度，从而避免外部的高渗环境导致细胞过度脱水、造成细胞损伤；添加蛋白组合物可以为细胞提供所需的养分，从而提高细胞的存活率；细胞生理活动抑制剂可以对细胞内的一些生理活动进行可逆的抑制，在不影响细胞活性的前提下提高冻存效果；氨磷汀是一种广谱的细胞保护剂和和辐射保护剂，可提高细胞对外界不良环境的耐受性、降低细胞内有毒物质的积累、提升干细胞的增殖活性。通过上述成分组合使用，可有效提高间充质干细胞的抗逆性、减少冻存过程造成的细胞活性损失，从而提高细胞存活率和冻存的复苏率。

技术领域

本发明属于人体组织冻存复苏技术领域，特别涉及一种改进的间充质干细胞保护液及其用途。

背景技术

间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的原始细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称为“万用细胞”，适用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复的种子细胞。因此，对间充质干细胞进行存储，可以提供重要的医学材料。传统的程序化冻存由于容易使液体产生结晶，往往会对细胞造成机械性损伤；新式的玻璃化冻存可以完全避免结晶问题，从而大大提高冻存细胞的复苏率。但是，玻璃化冻需要使用具有细胞毒性的二甲基亚砜，容易对细胞造成化学性伤害。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种改进的间充质干细胞保护液及其用途。

本发明具体技术方案如下：

本发明一方面提供了一种改进的间充质干细胞保护液，包括如下重量份数的成分：

20～25份渗透性保护剂、15～20份蛋白组合物、0.1～0.2份细胞生理活动抑制剂以及2～5份氨磷汀；

所述渗透性保护剂包括二甲基亚砜、甘油、肌醇、棉子糖、甘露醇、脯氨酸以及甜菜碱中的至少一种；

所述蛋白组合物包括牛血清白蛋白、植物源重组人血清白蛋白、γ-球蛋白、抗冻蛋白以及肌球蛋白中的至少一种；

所述细胞生理活动抑制剂包括细胞松弛素D、诺考达唑、衣霉素、几夫碱、布雷非德菌素A、奥曲肽以及阿糖胞苷中的至少一种。

渗透性保护剂可以渗透到细胞内，平衡细胞内外未结冰的水溶液中电解质的浓度，从而避免外部的高渗环境导致细胞过度脱水、造成细胞损伤；蛋白组合物可以为细胞提供所需的养分，从而提高细胞的存活率；细胞生理活动抑制剂可以对细胞内的一些生理活动进行可逆的抑制，在不影响细胞活性的前提下提高冻存效果；氨磷汀是一种广谱的细胞保护剂和和辐射保护剂，可提高细胞对外界不良环境的耐受性、降低细胞内有毒物质的积累、提升干细胞的增殖活性。通过上述成分，可有效提高间充质干细胞的抗逆性、减少冻存过程造成的细胞活性损失。

进一步地，所述渗透性保护剂包括重量份数比为5:2:1～3的二甲基亚砜、棉子糖以及脯氨酸。

二甲基亚砜是最常用的冷冻保护剂，效果优异但毒性较大，因此本发明中采用上述组合，以便减少二甲基亚砜的用量、降低细胞毒性，同时不影响冷冻保护剂的效果。

进一步地，所述蛋白组合物包括重量份数比为1:2:3～5的抗冻蛋白、γ-球蛋白以及植物源重组人血清白蛋白。

目前常规的细胞保存液主要使用胎牛血清或人血清白蛋白，细胞珍贵程度越高、对营养的要求就越高，上述成分的用量也越高；植物源重组人血清白蛋白基于植物生产制造，能够提供与血清相当的营养成分，可以替代胎牛血清，从而可降低成本；为保证细胞获得充足的营养，添加γ-球蛋白可以为细胞提供近似于人体内环境的环境，以利于细胞的存活；抗冻蛋白能移植冷冻过程中冰晶的生长、降低冰晶对细胞的伤害，从而提高细胞的存活率。

进一步地，所述细胞生理活动抑制剂包括重量份数比为1:1的奥曲肽和衣霉素。