[发明专利]一种免疫刺激复合物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种免疫刺激复合物及其制备方法和应用，属于免疫制剂技术领域。本发明提供的免疫刺激复合物包括4mg/mL的牛血清白蛋白、10mg/mL的三七总皂甙、250μg/mL的胆固醇、250μg/mL的卵磷脂和质量浓度为2％的表面活性剂；溶剂为磷酸盐缓冲液。本发明提供的免疫刺激复合物成本低廉，且对鱼类的免疫效果好。

技术领域

本发明涉及免疫制剂技术领域，具体涉及一种免疫刺激复合物及其制备方法和应用。

背景技术

免疫刺激复合物是由皂甙、脂类及抗原成分通过疏水作用形成的粒径约为40nm的球状颗粒。它能有效地提呈抗原至免疫系统，提高机体免疫机能，获得更好的免疫效果。目前制备免疫刺激复合物所用的皂甙主要是商品名为QuilA的奎拉雅属皂甙，它产于南美洲并依赖进口，但由于该皂甙资源稀缺，近年来进口成本逐年攀升，因此用其制备免疫刺激复合物的成本也不断提高，限制了该免疫刺激复合物的应用。现有技术并没有报道一种可替代QuilA的成本低的活性组分来源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种免疫刺激复合物及其制备方法和应用。本发明提供的免疫刺激复合物成本低廉，且对鱼类的免疫效果好。

本发明提供了一种免疫刺激复合物，所述免疫刺激复合物包括4mg/mL的牛血清白蛋白、10mg/mL的三七总皂甙、250μg/mL的胆固醇、250μg/mL的卵磷脂和质量浓度为2％的表面活性剂；溶剂为磷酸盐缓冲液。

优选的是，所述表面活性剂为N-癸酰基-N-甲基葡糖胺。

优选的是，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.4。

优选的是，所述免疫刺激复合物的粒径为25～45nm。

本发明还提供了上述技术方案所述免疫刺激复合物的制备方法，包括以下步骤：

1)以磷酸盐缓冲液为溶剂，将牛血清白蛋白与表面活性剂混合，37℃静置4h，得到裂解后的牛血清白蛋白；

2)将步骤1)得到的裂解后的牛血清白蛋白与三七总皂苷混合，得到第一无色透明溶液；

3)将步骤2)得到的第一无色透明溶液与卵磷脂和胆固醇混合，进行超声处理，得到第二无色透明溶液；

4)将步骤3)得到的第二无色透明溶液在磷酸盐缓冲液中于4℃透析72h，得到免疫刺激复合物。

优选的是，所述步骤3)超声处理的温度为0℃。

优选的是，所述步骤3)超声处理的功率为200W，超声时间为15min。

优选的是，所述步骤4)的透析的截留分子量为14.9KD。

本发明还提供了一种含有上述技术方案所述免疫刺激复合物或上述技术方案所述制备方法得到的免疫刺激复合物的能够提高鱼类免疫机能的饲料。

优选的是，所述饲料中免疫刺激复合物的质量百分含量为0.1％～0.5％。

本发明提供了一种免疫刺激复合物。本发明提供的免疫刺激复合物采用三七总皂甙进行制备，相比于QuilA制备的免疫刺激复合物，制备成本得到大幅度降低，且所述免疫刺激复合物可提高鱼类免疫机能。试验结果表明，当饲料中添加0.1％和0.5％的免疫刺激复合物时，罗非鱼血清部分免疫指标得到提升，同时提高了罗非鱼抗嗜水气单胞菌感染能力，与对照相比，存活率分别提高30％和40％。此外，口服免疫刺激复合物可提高大黄鱼非特异性免疫反应，提高部分免疫因子的表达水平。

附图说明

图1为本发明实施例2提供的透射电镜下观察到的免疫刺激复合物结构图；

图2为本发明实施例3提供的斑点ELISA法检测结果图；