[发明专利]一种基于抗体和巨胞饮的双靶向抗肿瘤重组蛋白的制备及用途有效
| 申请号： | 201711390128.3 | 申请日： | 2017-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN108129569B | 公开（公告）日： | 2020-08-07 |
| 发明（设计）人： | 王晓飞;盛唯瑾;甄永苏;李良;王阳阳;张胜华;李毅;刘秀均 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医药生物技术研究所 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;A61K38/16;A61K47/68;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京华科联合专利事务所(普通合伙) 11130 | 代理人： | 杨厚;孟旭 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 抗体 巨胞饮 靶向 肿瘤 重组 蛋白 制备 用途 | ||
1.一类基于抗体和巨胞饮的双靶向抗肿瘤药物，其特征是，所述抗肿瘤药物由重组蛋白及偶联化疗药物组成，
其中，重组蛋白由scFv-连接肽(G4S)2-辅基蛋白-连接肽(G4S)2-人血清白蛋白DomainIII组成，如SEQ ID NO:1氨基酸序列所示，共578个氨基酸，
其中，化疗药物为疏水性化学小分子药物。
2.权利要求1所述抗肿瘤药物，其特征是，所述化疗药物为力达霉素发色团、紫杉醇、平阳霉素。
3.权利要求1所述抗肿瘤药物，其特征是，所述重组蛋白的编码基因，如SEQ IDNO:2核苷酸序列所示，共1734bp。
4.权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征是，重组蛋白的制备方法，其主要步骤是：
A.重组表达载体pPIC9K-scFv-辅基蛋白-人血清白蛋白Domain III的构建；
B.重组蛋白在毕赤酵母中的表达；
C.重组蛋白的纯化。
5.权利要求4所述的制备方法，其特征是，
运用基因工程技术获得scFv-(G4S)2-辅基蛋白-(G4S)2-人血清白蛋白Domain III基因和His6-tag序列；将scFv-(G4S)2-辅基蛋白-(G4S)2-人血清白蛋白Domain III基因和His6-tag序列基因片段与pPIC9K质粒载体进行连接，得到重组质粒表达载体pPIC9K-scFv-辅基蛋白-人血清白蛋白Domain III。
6.权利要求4或5所述的制备方法，其特征是，将重组质粒表达载体pPIC9K-scFv-辅基蛋白-人血清白蛋白Domain III转化至大肠杆菌DH5α中，提取表达质粒，经Sal I酶切线性化，转化毕赤酵母GS115感受态细胞，培养、诱导表达，检测重组蛋白，含pPIC9K-scFv-辅基蛋白-人血清白蛋白Domain III表达载体菌株命名为GS115-FL3，其编号为CGMCCNo.14867。
7.权利要求4或5所述的制备方法，其特征是，将含pPIC9K-scFv-辅基蛋白-人血清白蛋白Domain III表达载体菌株接种于BMGY生长培养基，220rpm，30℃培养36h，将其转移至BMMY诱导培养基，250rpm，28℃诱导表达96-120h，离心收集上清，经0.45μm滤膜过滤后，用HisTrap亲和层析柱进行纯化。
8.权利要求1所述双靶向抗肿瘤药物在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
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