[发明专利]一种环孢素A眼凝胶的杂质控制方法

说明书

本发明提供了一种环孢素A眼凝胶的杂质控制方法，采用高效液相色谱进行测定，其中色谱条件如下：检测波长为210‑230nm；柱温为60‑68℃；流速为0.8‑1ml/min；流动相A：THF‑水‑磷酸。本发明杂质控制方法能很好的同时解决辅料干扰问题和众多杂质的分离问题，也为本类制剂杂质的质量标准制定提供了一个有效的方法。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，特别涉及一种环孢素A眼凝胶的杂质控制方法。

背景技术

环孢素A(cyclosprine,CyA)是由11个氨基酸组成的环状多肽,是土壤中一种真菌的活性代谢物。1978年英国首次将CyA应用于临床肾移植,此后CyA又用于肝、心、肺、胰腺、骨髓等器官的移植,均取得令人满意的效果,明显提高病人的生存率。1984年环孢素A进入中国,形成了环孢素A+硫唑嘌呤+激素的三联免疫抑制方案,大大提高了移植存活率,同时也使移植术后急性排斥反应的发生率大幅下降。CyA作为一种强效免疫抑制剂,近年来人们对它的研究越来越多,广泛应用于各种疾病的治疗。

环孢素具有难溶性，制成均一的凝胶或者液体制剂，需要将环孢素溶解，通常加入聚氧乙烯蓖麻油，蓖麻油或者吐温等助溶剂，以保证环孢素溶解，且在储存使用过程中不析出。但是增溶剂一般紫外出峰都很强烈，存在辅料干扰风险，且环孢素工艺杂质和降解杂质众多。现有各种原料的杂质控制方法，无法有效的检出这些杂质。

环孢素凝胶、环孢素眼用乳剂以及环孢素注射液都含有增溶剂,这些增溶剂大都有以下几种：聚氧乙烯蓖麻油35、聚氧乙烯蓖麻油40，蓖麻油等；这类增溶剂紫外响应值很高，出风强烈，且极性和环孢素类似，因此这些辅料往往对环孢素杂质检测影响很大。暂时还没有关于控制环孢素制剂杂质的专利发表。文献和各国药典收录的环孢素制剂，也没有杂质控制项目和控制方法。

对于眼用制剂，国家要求按照注射剂管理，因此制剂的杂质控制十分严格。但是目前国内外专利和药典法案，环孢素胶囊，环孢素注射液等都没有对杂质提出控制方法和限度,因此给临床应用带来风险，也降低了产品的质量。如何解决检测中辅料干扰问题和众多杂质的分离控制成为急待解决的问题。

已经公布的控制环孢素杂质的方法，是中国药典环孢素原料方法,分析方法为：

色谱柱：C₁₈色谱柱(150×4.6mm,5μm)

流动相：乙腈-水-叔丁基甲醚-磷酸(430:520:50:1)

流速：1.0ml/min

柱温：70℃

波长：220nm

进样量：80μl

上述方法的问题是：同时检测多个杂质的专属性不好，杂质与主峰分离度欠佳，个别杂质峰出峰过早，空白辅料干扰出峰早的杂质检测。混标色谱图如图1。从图1可看出，前面两个杂质分离度很差，而且主峰后的杂质根本无法实现基线分离,无法同时对多个已知杂质进行控制。无法实现杂质与杂质、杂质与主峰的分离,且辅料峰干扰严重，影响了杂质的检测。因此需建立一个新的有关物质方法，能够检测和分离以上6个已知杂质(环孢素B、环孢素C、环孢素D、环孢素H、异环孢素A、异环孢素H)和未知杂质。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种环孢素A眼凝胶的杂质控制方法，用高效液相色谱进行测定，其中色谱条件如下：

检测波长为210-230nm；

柱温为60-68℃；

流速为0.8-1ml/min；

流动相：THF-水-磷酸。

作为优选，流动相THF-水-磷酸的体积比为400:600:1.5-2。

作为优选，所述柱温为65℃。