[发明专利]一种从蛇毒中提取凝血因子X激活剂的方法

权利要求书

1.一种从圆斑蝰蛇蛇毒中提取凝血因子X激活剂的方法，其特征在于，包括：

(a)获得蛇毒原料液；

(c)将蛇毒原料液进行阴离子交换柱层析，收集目标峰对应的组分，其后用于羟基磷灰石柱层析；

其中所述阴离子交换柱层析的层析条件如下：

填料为琼脂糖介质；

洗脱液为含NaCl的pH值为8.0-8.6的Tris-HCl缓冲液，其中Tris-HCl缓冲液的浓度为10mM-30mM，NaCl的浓度为0.1M-0.5M；

(b)进行羟基磷灰石柱层析，收集目标峰对应的组分获得凝血因子X激活剂；

其中所述羟基磷灰石柱层析的层析条件如下：

填料为I型或II型羟基磷灰石填料；

洗脱液为含NaCl的pH值为6.5-7.5的磷酸缓冲液，其中磷酸缓冲液的浓度为10mM-30mM，NaCl的浓度为0.1M-0.8M。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，磷酸缓冲液pH值为6.8，磷酸缓冲液浓度为20mM；NaCl的浓度为0.4M。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)羟基磷灰石柱层析的洗脱流速为50cm/小时-1000cm/小时。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)羟基磷灰石柱层析的洗脱流速为100cm/小时-800cm/小时。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)羟基磷灰石柱层析的洗脱流速为600cm/小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)中，阴离子交换柱层析的填料选自Sepharose H.P.、Sepharose F.F.或Capto。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(c)中，阴离子交换柱层析的填料选自Q Sepharose H.P.、Q Sepharose F.F.或Capto Q。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)中，Tris-HCl缓冲液的pH值为8.5，Tris-HCl缓冲液的浓度为20mM；NaCl的浓度为0.2M。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)的阴离子交换柱层析的洗脱流速为30cm/小时-150cm/小时。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(c)的阴离子交换柱层析的洗脱流速为80cm/小时-120cm/小时。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤(c)的阴离子交换柱层析的洗脱流速为为90cm/小时。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(b)的羟基磷灰石柱层析之后，还包括以下步骤：

(d)将步骤(b)收集的目标峰对应的组分进行分子筛层析来进一步纯化，收集目标峰对应的组分获得凝血因子X激活剂，

其中所述分子筛层析的层析条件如下：

填料选自凝胶过滤介质；

洗脱液为pH值为6.5-7.5的磷酸缓冲液，磷酸缓冲液浓度为40mM-80mM。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(d)中，磷酸缓冲液pH值为6.8，浓度为50mM。

14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤(d)分子筛层析的洗脱流速为10cm/小时-35cm/小时。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，步骤(d)分子筛层析的洗脱流速为20cm/小时。