[发明专利]应用RPA-DNA试纸条联检对转基因水稻PA110-15品系特异性检测方法

权利要求书

1.一种用于通过重组酶聚合酶等温扩增及DNA试纸条联检检测转基因水稻PA110-15的引物和探针的组合，其特征在于: 正向引物序列如SEQ ID NO1所示，反向引物序列如SEQID NO2所示，探针序列如SEQ ID NO3所示；具体为：

SEQ ID NO1：称为PA110-RPA-LFD-F，序列为：CGAGTTTCTCCATAATAATGTGTGAGTAGTT

SEQ ID NO2：称为PA110-RPA-LFD-R，序列为：

(Biotin) GATTTGATTTGGCTGATCTAGGAGTTACT

SEQ ID NO3：称为PA110-RPA-LFD-P，序列为：

(FAM)TAAAAACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTTG(dSpacer)CTAAGCGTC(phosphate)。

2.一种检测包含转基因水稻PA110-15的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含权利要求1所述的引物和探针的组合。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：进一步包括DNA试纸条。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述DNA试纸条具体为Milenia GenlineHybriDetect 1 Lateral Flow Strips或相同原理DNA试纸条。

5.一种通过重组酶聚合酶等温扩增及DNA试纸条联检检测含有转基因水稻PA110-15的方法，其特征在于：提取待测样品的DNA作为模板，利用权利要求1所述的引物和探针的组合进行快速扩增，随后进行DNA试纸条检测，如果在试纸条质控线和检测线的位置上皆出现条带，则证明所检样品含有转基因水稻PA110-15成分。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：

以50μL扩增体系计，其中Rehydration Buffer 29.5 μL，280μmol/L的MagnesiumActate 2.5μL，10μmol/L的引物各2μL，10μmol/L的探针0.5μL，模板DNA 50ng，水补充到50μL。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述扩增程序为：39摄氏度水浴或恒温仪上反应20分钟。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：扩增反应完成后，利用DNA试纸条进行检测，扩增产物用PBST缓冲液稀释50倍，然后取20-30 μL滴加在试纸条上；1 min内肉眼观察，在阳性样品的试纸条上，质控线和检测线位置处皆出现条带，而阴性样品只在质控线位置处出现条带。

9.如权利要求5-8任一项所述的方法，其特征在于：所述DNA试纸条具体为MileniaGenline HybriDetect 1 Lateral Flow Strips或相同原理DNA试纸条。