[发明专利]一种检测香菇多糖含量的方法

说明书

本发明涉及分析检测领域，特别涉及一种检测香菇多糖含量的方法。该检测方法中ΔA最大波长为544nm，25℃反应30min，pH7。ΔA544(Y)与香菇多糖浓度(X)在5～80μg/mL的范围内具有良好的线性关系，回归方程为Y＝0.0049X+0.0043(R2＝0.9985)。该方法具有高的灵敏度、专属性和准确度，精密度RSD为1.79％，稳定性RSD为0.85％，平均加样回收率为99.10％，LOD为1.41μg/mL。该方法可用于香菇多糖中含三股螺旋结构多糖含量的测定，是一种简便、快速、高效可行的测定方法。

技术领域

本发明涉及分析检测领域，特别涉及一种检测香菇多糖含量的方法。

背景技术

香菇多糖(Lentinan，LNT)来源于香菇(Lentinusedodes(Berk.)Sing.)，是香菇子实体中的有效活性成分，具有显著的平衡免疫功能的作用，可通过激活机体免疫系统发挥抗肿瘤、抗感染、抗辐射和抗凝血等多种药理作用。

LNT的生物学活性与其主链结构、空间构型等因素密切相关。研究发现只有含三螺旋结构的LNT才具有明显的抗肿瘤活性。LNT三螺旋结构来源于其结构中的β-(1,3)-D-葡聚糖分子。由于β-(1,3)-D-葡聚糖分子内多羟基的相互作用，常形成致密的三螺旋结构。据报道，以β-(1,3)-D-葡聚糖为主链的LNT对S180荷瘤小鼠的肿瘤抑制率高达81％。

目前针对三螺旋结构LNT的检测方法主要有三类：1)酶法。酶促反应是一种重要的多糖结构研究手段，但该法步骤繁琐，酶的类型及比例等因素均对检测结果有较大影响，且高活性的专一酶价格较贵；2)蛋白特异识别法，如鲎G因子法。鲎G因子法具有快速、灵敏等优点，但易受葡聚糖分子量、分支度及多糖三维结构的影响，同样存在步骤繁琐、价格昂贵等缺点，应用有限；3)无机化学法，如苯酚-硫酸法。无机化学法价格低廉，但耗时长，且对多糖三螺旋结构无特异性。因此，目前尚缺乏针对三螺旋结构LNT的便捷、灵敏度高、经济实用的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种刚果红分光光度法检测三螺旋结构香菇多糖的快速定量分析方法，该法对三螺旋结构香菇多糖具有高度专属性和良好的灵敏度、准确度，可用于三螺旋结构香菇多糖的快速测定。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种检测香菇多糖含量的方法，包括如下步骤：

步骤1：配制香菇多糖标准品溶液，取浓度梯度的香菇多糖标准品与刚果红溶液反应，经分光光度法检测，测得对应的吸光度，获得标准曲线；

步骤2：配制香菇多糖提取物样品溶液，取样品溶液与刚果红溶液反应，经分光光度法检测，测得对应的吸光度，对应所述标准曲线，获得所述待测样品的浓度；

步骤1或步骤2中所述检测的波长为400-600nm。

在本发明的一些具体实施方案中，步骤1或步骤2中所述检测的波长为544nm。

在本发明的一些具体实施方案中，步骤1或步骤2中所述混合后的溶液的pH值为5-10。

作为优选，步骤1或步骤2中所述混合后的溶液的pH值为7。

在本发明的一些具体实施方案中，步骤1或步骤2中所述反应的温度为3-60℃。

作为优选，步骤1或步骤2中所述反应的温度为25℃。

在本发明的一些具体实施方案中，步骤1或步骤2中所述反应的时间为1-60min。

作为优选，步骤1或步骤2中所述反应的时间为30min。