[发明专利]一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒有效
| 申请号： | 201711395640.7 | 申请日： | 2017-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN108048390B | 公开（公告）日： | 2021-04-27 |
| 发明（设计）人： | 那洁;朱咏林;张凤枝;段福宇 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100084 北京市海淀区北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 血管 内皮 细胞 方法 及其 专用 试剂盒 | ||
1.用于制备血管内皮细胞的试剂盒；所述试剂盒含有培养液II；
所述培养液II由血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、VEGF、bFGF和不含血清的基础培养液组成；所述不含血清的基础培养液为RPMI 1640培养基。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：每1mL所述培养液II中血清白蛋白为0.1-2.5mg、转铁蛋白为1-25μg、维生素C为0.04-1mg、亚硒酸钠为2-50ng、VEGF为10-250ng和bFGF为2-50ng，所述培养液II溶剂为不含血清的基础培养液，pH值为7.0～7.6。
3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有培养液I；
所述培养液I由血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、BMP4、GSK3抑制剂和不含血清的基础培养液组成；所述不含血清的基础培养液为RPMI 1640培养基。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：每1mL所述培养液I由0.1-2.5mg血清白蛋白、1-25μg转铁蛋白、0.04-1mg维生素C、2-50ng亚硒酸钠、2-50ng BMP4和1-10μM GSK3抑制剂组成，所述培养液I溶剂为不含血清的基础培养液，pH值为7.0～7.6。
5.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有培养液III-1和/或培养液III-2；
所述培养液III-1为TeSR-E8完全培养液；
所述培养液III-2为含2－10μM ROCK抑制剂的TeSR-E8完全培养液。
6.一种培养血管内皮细胞的方法，包括如下步骤：
（3）将人多能干细胞接种至权利要求3或4中所述培养液I，培养，得到心血管前体细胞；
（4）完成步骤（3）后，将心血管前体细胞接种至权利要求1或2中所述培养液II，培养；得到血管内皮细胞。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法还包括步骤（5）：完成步骤（4）后，将血管内皮细胞接种至权利要求1或2中所述培养液II，培养。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：在进行所述步骤（3）前，进行步骤（1）和（2）；
所述步骤（1）为：将人多能干细胞接种至权利要求5中所述培养液III-2，培养1d±0.5d；
所述步骤（2）为：将完成步骤（1）的人多能干细胞至权利要求5中所述培养液III-1，培养1d±0.5d。
9.如权利要求6至8任一所述的方法，其特征在于：所述培养的参数为：36℃-38℃。
10.如权利要求6至8任一所述的方法，其特征在于：所述人多能干细胞为人胚胎干细胞系或人诱导性多能干细胞系。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于：所述人胚胎干细胞系为人胚胎干细胞系H1或人胚胎干细胞系H7或人胚胎干细胞系H9；
所述人诱导性多能干细胞系为人诱导性多能干细胞系CD34-iPSC。
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