[发明专利]用于鉴定西藏红豆杉的SNP分子标记及应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴定西藏红豆杉的SNP分子标记，所述SNP分子标记位于SEQ ID NO.1所示序列的第314位碱基，若第314位的碱基为A，则鉴定为西藏红豆杉。本发明基于SNP分子标记建立起了快速鉴定西藏红豆杉的体系。从而达到快速、准确检测西藏红豆杉的目的，对于口岸物种检验工作等具有重大的意义。

技术领域

本发明涉及木材材种鉴定的分子生物学检测领域，具体地说，涉及用于西 藏红豆杉的SNP分子标记及其应用。

背景技术

西藏红豆杉(拉丁学名Taxus wallichiana Zucc.)，又称喜马拉雅红豆杉，为 红豆杉科红豆杉属植物。乔木或大灌木，一年生枝绿色。叶条形，质地较厚。雌 雄异株，球花单生叶腋；雄球花圆球形，具多数螺旋状排列的雄蕊，具短梗；雌球 花几无梗。种子当年成熟，坚果状，柱状长圆形，生于肉质、红色、杯状假种皮 中。西藏特有树种，为国家Ⅰ级重点保护野生植物，分布于阿富汗、尼泊尔以及 中国大陆的西藏等地。

西藏红豆杉是中国分布区最小，也是资源蕴藏量最小的种类，但资源基本未 遭破坏。木材心边材区别明显，纹理均匀，结构细致，硬度大，韧性强，干后少 挠裂。为优良的建筑、桥梁、家具、器具、车辆等用材。可作产区的造林树种。

其珍贵奇特的药用价值引起国内外专家的关注，它所含的紫杉醇对癌症有良 好的疗效，对糖尿病、冠心病等有一定的疗效，应用开发前景可观。

形态学鉴定是西藏红豆杉鉴定中常采用的方法，但形状特征易受生境、气候、 生理状况等的影响而常常导致主观辨别上的偏差，仅靠形态差异难以准确鉴定。

近年来，利用分子生物学技术进行物种鉴定已经在一些珍惜物种及检验检 疫方面得到了应用，如何利用分子生物学技术建立高效、快速、灵敏且准确度高 的鉴定方法将是西藏红豆杉鉴定领域的关键技术之一。

发明内容

本发明提供一种用于鉴定西藏红豆杉的SNP分子标记，所述SNP分子标记 位于SEQID NO.1所示序列的第314位碱基，若第314碱基为A，则鉴定为西 藏红豆杉。

所述SNP分子标记在西藏红豆杉鉴定中的应用。

所述的应用具体的包括从南方红豆杉、曼地亚红豆杉、欧洲红豆杉、西藏红 豆杉、东北红豆杉和云南红豆杉中鉴定出西藏红豆杉。

本发明提供了一种用于鉴定西藏红豆杉的核苷酸序列，包括SEQ ID NO.1， 或者SEQ ID NO.1所对应的cDNA或mRNA，所述SEQ ID NO.1所示序列的第 314位碱基为A。

本发明提供了一种鉴定西藏红豆杉的试剂盒，包括用于特异性检测SEQ ID NO.1序列第314位的碱基为A存在与否的一种或多种引物，或引物和探针的组 合。所述引物和探针选自：

用于测序鉴定的特异性扩增引物F1、R1和测序引物，引物序列分别为

上游引物F1：5'-GCGGTAGGATCATTGTCG-3'

下游引物R1：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'

测序引物：5'-GCGGTAGGATCATTGTCG-3'

或者，用于荧光定量PCR检测的扩增特异性引物和探针，引物和探针序列 分别为：

上游引物F2：5'-TGGGTGCACCAGCGACTC-3'

下游引物R2：5'-CTGCTTTGCAGACCGGCA-3'

探针P2：5'-TCGAAGGGTCCCAGAAATTTCCACCT-3'；

或者，用于ARMS-PCR检测的特异性扩增引物，引物序列为：