[发明专利]欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉的SNP分子标记及应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴定欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉的SNP分子标记，所述SNP分子标记位于SEQ ID NO.1所示序列的第450位碱基，若第450位的碱基为C，则鉴定为欧洲红红豆杉或曼地亚豆杉。本发明基于SNP分子标记建立起了快速鉴定欧洲红红豆杉或曼地亚豆杉的体系。从而达到快速、准确检测欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉的目的，对于口岸物种检验工作等具有重大的意义。

技术领域

本发明涉及木材树种鉴定的分子生物学检测领域，具体地说，涉及欧洲或 曼地亚红豆杉的SNP分子标记，并利用该SNP位点将上述两类树种从其他的红 豆杉品种中鉴定出来的应用。

背景技术

红豆杉，又叫紫杉，属于国家一级保护植物，是第四纪冰川以后遗留下来的 世界珍稀濒危物种。红豆杉，既有高大的乔木，又有低矮的灌木，全世界约有几 十种，曼地亚红豆杉就是其中之一。曼地亚红豆杉是红豆杉的其中一种，红豆杉 (学名Taxus mairei)是第四纪冰川时期孑遗植物，世界珍稀濒危物种，在全 世界共有十一种，目前我国共有四个种和一个变种，即云南红豆杉、西藏红豆杉、 东北红豆杉、中国红豆杉和南方红豆杉(变种)。曼地亚红豆杉是我国20世纪 90年代中期从加拿大引种而来。现在四川、广西资源、山东等地有栽培。3年的 曼地亚基本都是带花蕾的，雄性曼地亚的花蕾比较大比较明显，从8月份花蕾开 始明显，一直到来年的3月左右开花，给雌株授粉。雌株花蕾比较小，和芽很相 似，开花的时候是一个小水珠，没有花粉。

红豆杉有植物活化石和国宝之称。从中提取的紫杉醇是世界公认的抗癌 药物，每公斤市场价在一千万美元以上，是世界上濒临灭绝的天然珍稀抗癌植物， 属国家一级保护植物，至今已有250万年的历史。由于它的根、茎、叶、皮及种 子含有紫杉醇，所以价格相当昂贵，不少国家将其列为国宝。美国、英国、俄 罗斯、韩国和中国对紫杉进行多年研究，将紫杉醇从紫杉中提炼出来，用于临床 治疗癌症。经验证明，紫杉醇具有独特的抗肿瘤机制和显著的抑制肿瘤的作用， 被专家和学者确认为本世纪初国际上最有开发前途的抗癌药物。

形态学鉴定是欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉鉴定中常采用的方法，但形状特征 易受生境、气候、生理状况等的影响而常常导致主观辨别上的偏差，仅靠形态差 异难以准确鉴定。

近年来，利用分子生物学技术进行物种鉴定已经在一些珍惜物种及检验检 疫方面得到了应用，如何利用分子生物学技术建立高效、快速、灵敏且准确度高 的鉴定方法将是欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉领域的关键技术之一。

发明内容

本发明提供了一种用于鉴定欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉的SNP分子标记， 所述SNP分子标记位于SEQ ID NO.1所示序列的第450位碱基，若第450碱基 为C，则鉴定为欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉。

所述SNP分子标记在欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉鉴定中的应用。

进一步的，从南方红豆杉、曼地亚红豆杉、欧洲红豆杉、西藏红豆杉、东北 红豆杉和云南红豆杉中鉴定出欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉。

本发明提供了一种用于鉴定欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉的核苷酸序列，所述 核苷酸序列包括SEQ ID NO.1，或者SEQ ID NO.1所对应的cDNA或mRNA， 所述SEQ ID NO.1序列的第450碱基为C。

本发明提供了一种鉴定欧洲红豆杉或曼地亚红豆杉的试剂盒，包括用于特异 性检测SEQ ID NO.1序列第450碱基为C存在与否的一种或多种引物，或引物 和探针的组合。

进一步的，所述引物和探针选自：用于测序检测的特异性扩增引物和测序引 物，引物序列分别为：

上游引物F1：5'-GCGGTAGGATCATTGTCG-3'

下游引物R1：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'

测序引物：5'-GCGGTAGGATCATTGTCG-3'；