[发明专利]一种聚丙烯酰胺凝胶及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种聚丙烯酰胺凝胶，由分离胶和浓缩胶组成，分离胶为6～15wt％聚丙烯酰胺、0.35～0.4M三羟甲基氨基甲烷、0.03～0.2wt％四乙基乙二胺、0.1～1wt％亚硫酸氢钠和0.08～0.15wt％过硫酸铵；浓缩胶为4～5wt％聚丙烯酰胺、0.1～0.15M三羟甲基氨基甲烷、0.08～0.4wt％四乙基乙二胺、0.05～0.5wt％亚硫酸氢钠和0.08～0.15wt％过硫酸铵。本发明的聚丙烯酰胺凝胶因多种成份协同作用，保证稳定的凝胶凝固速度又提升溶液的长期稳定性，凝胶电泳分离蛋白的效果良好，蛋白条带清晰，不添加挥发性有毒加速剂TEMED的设计保证实验人员不受挥发性有毒化合物的伤害。

技术领域

本发明属于聚丙烯酰胺凝胶电泳，具体涉及一种聚丙烯酰胺凝胶及其试剂盒。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE),是目前生物试验中应用最为广泛也是最为基础的实验,它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)。目前传统的PAGE主要是单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺以过硫酸铵(APS)为催化剂，以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂聚合而成，在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，自由基引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构，制成凝胶。但是，传统的凝胶有以下几个缺点：

1、TEMED有挥发性易燃，有腐蚀性，而且具有强神经毒性以及刺激性气味。

2、制备过程复杂，需要混合多种溶液。制胶过程费时，大大降低实验人员的实验效率，而且后加入的TEMED强烈刺激性气味会对实验人员健康产生不好的影响。

3、凝胶速度慢，传统分离胶凝胶速度为30min～1h，浓缩胶为30min左右。

4、浓缩胶无色，上样时容易将样品加到样品孔外去，样品之间易造成污染，影响蛋白分离后的结果判定。

目前市面也有类似的PAGE凝胶快速配制试剂，但另外产生种种不佳体验，如需要额外添加TEMED、电泳速度明显下降、丙烯酰胺溶液易水解稳定性不佳等。

申请人也尝试将TEMED预先加入分离胶液体中，但这会导致溶液性能不稳定，易分解，3～4天就失去效果。

综上，对于传统的聚丙烯酰胺凝胶亟需一种制备快速简便、不含易燃，有腐蚀性，具强神经毒性成份TEMED、长期保存稳定的快速聚丙烯酰胺凝胶配制试剂盒。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种聚丙烯酰胺凝胶，本发明的目的之二在于提供上述聚丙烯酰胺凝胶的试剂盒。

为达上述目的，本发明采取如下技术方案：

1.一种聚丙烯酰胺凝胶，所述聚丙烯酰胺凝胶由分离胶和浓缩胶组成，所述分离胶为6～15wt％聚丙烯酰胺、0.35～0.4M三羟甲基氨基甲烷、0.03～0.2wt％四乙基乙二胺、0.1～1wt％亚硫酸氢钠和0.08～0.15wt％过硫酸铵；所述浓缩胶为4～5wt％聚丙烯酰胺、0.1～0.15M三羟甲基氨基甲烷、0.01～0.1wt％SDS、0.08～0.4wt％四乙基乙二胺、0.05～0.5wt％亚硫酸氢钠和0.08～0.15wt％过硫酸铵。

进一步，所述分离胶还包括0.01～0.1wt％SDS，所述浓缩胶还包括0.01～0.1wt％SDS。

进一步，所述聚丙烯酰胺由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺质量比为29～30:0.8～1聚合而成。

进一步，所述分离胶的pH值为8.6～9.2，所述浓缩胶的pH值为6.7～7.5。

进一步，所述分离胶的pH值为8.8，所述浓缩胶的pH值为6.8。