[发明专利]用于血管紧张素Ⅱ检测的二肽衍生物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原，其特征在于，由脯氨酸-苯丙氨酸二肽衍生物和载体连接而成，所述脯氨酸-苯丙氨酸二肽衍生物的结构式如下述式(Ⅰ)所示，所述脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的结构式如下述式(Ⅱ)所示：

所述载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽，选自血清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白中的一种。

2.一种权利要求1所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将适量的载体蛋白溶解于磷酸缓冲液中，得到载体蛋白溶液；

(2)将适量的权利要求1中的脯氨酸-苯丙氨酸二肽衍生物，二甲基甲酰胺、乙醇、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶解于磷酸钾缓冲液中，搅拌反应，得到溶解后的混合液；

(3)将所述溶解后的溶混合液滴加至步骤(1)得到的载体蛋白溶液中，并在2～8℃下搅拌过夜，得到抗原，将合成好的抗原经过透析进行纯化，得到脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原。

3.根据权利要求2所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，所述脯氨酸-苯丙氨酸二肽衍生物的制备方法为：

1)将适量的化合物1溶于二氯甲烷中，然后加入化合物A和反应溶剂配制成反应混合溶液Ⅰ反应，得到反应后的混合液Ⅰ，再将反应后的混合液Ⅰ萃取得到有机相，再将所述有机相浓缩纯化后，得到化合物2，具体反应如下述所示：

2)将适量的化合物2溶于乙酸乙酯中，然后加入EA/HCl，配制成反应混合溶液Ⅱ反应，得到反应后的混合液Ⅱ，再将所述反应后的混合液Ⅱ浓缩，得到化合物2，具体反应如下述所示：

3)称适量的化合物3溶解于DCM中，然后加入适量的化合物B和TEA配制成反应混合液Ⅲ；再将所述反应混合液Ⅲ搅拌反应，得到反应后的混合液Ⅲ，然后将反应后的混合液Ⅲ进行浓缩以得到化合物4，具体反应如下述所示：

4)称取适量的化合物4溶于THF和H₂O中，然后加入适量的LiOH配制成反应混合液Ⅳ，再将所述反应混合液Ⅳ搅拌反应，得到反应后的混合液Ⅳ，再将所述反应后的混合液Ⅳ浓缩纯化，得到脯氨酸-苯丙氨酸二肽衍生物，具体反应如下述所示：

4.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，所述化合物1与所述化合物A的摩尔比为96.3∶112。

5.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，所述反应溶剂包括HOBT、EDCI和TEA。

6.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，将所述反应混合溶液Ⅰ于30℃下搅拌过夜反应。

7.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，将反应后的混合液Ⅰ通DCM重复萃取4次得到有机相。

8.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，所述化合物2与所述乙酸乙酯的摩尔体积比为44∶100。

9.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，将反应混合溶液Ⅱ于30℃下搅拌3小时。

10.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，所述化合物3与所述化合物B的摩尔比为1∶1。

11.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，将所述反应混合液Ⅲ在40℃下搅拌过夜。

12.根据权利要求3所述的脯氨酸-苯丙氨酸二肽免疫原的制备方法，其特征在于，将反应后的混合液Ⅲ进行浓缩后得到粗产物，再所述粗产物通过硅胶柱(DCM∶ACOH＝10∶1)进行纯化，得到化合物4。